调肝治法影响慢性应激大鼠海马神经干细胞分化机制的研究.pdf

中又捅要 目的： 近年来生活压力的增加使人们长期处于慢性应激状态，慢性心理应激损伤已成为 威胁人们身心健康的超级隐患，精神类疾病抑郁症则是其中一种。慢性心理应激导致 海马神经干细胞受损，从而影响学习记忆功能，相关疾病已成为生物学研究界的重要 课题。 中医藏象学理论认为肝主疏泄，肝通过疏通功能、调节全身气机，使脏腑经络之 气、血的运行通畅无阻，维持人体的正常情志活动。情志与“肝主疏泄”的功能密 切相关，其功能正常与否在人体情绪及精神活动中扮演着非常重要的角色。肝主疏泄 的实质内涵在于条畅全身气机的流畅，调节人体精、气、神、血、水的正常运转，肝 的疏泄功能是人体脏腑功能活动的基本形式的概括。中医认为情志失常引起机体气血 运行失常，阴阳失衡是情志因素导致疾病发生的基本病机，而气血运行失常与现代病 理生理学中心理应激理论关于疾病的认识有很多相似之处，二者对不良情绪诱导或引 发疾病的内在机制有许多相似之处。肝失疏泄所致肝郁多由长期情志不畅所致。临床 表现以精神抑郁、萎靡不振、胸闷胁胀、不思饮食、失眠多梦、多疑善虑、悲伤欲哭、 善长太息为主症，这些症状与慢性心理应激抑郁相似。慢性心理应激与中医肝藏象的 疏泄功能，特别是情志内郁导致肝失疏泄、气机郁滞密切相关。可以认为，肝郁即肝 失疏泄是慢性应激抑郁症发病的重要环节。临床上肝郁证所表现出的全身应激反应的 失调，实际是神经内分泌免疫功能的失调，这可能是慢性应激抑郁症和肝失疏泄之肝 郁证共同的病理学基础。因此认为慢性心理应激属于中医情志病因的范畴。 研究已经证实，肝主疏泄条畅情志的功能不仅对HPA轴有调节作用，而且对中枢 神经机制有调节作用。疏肝解郁法治疗心理应激性病变，已被大量研究成果证实是一 种有效的疗法，肝主疏泄能改善慢性应激抑郁模型大鼠海马神经干细胞的损伤，改善 情绪活动及学习记忆能力。疏肝方药四逆散通过激活Wnt信号通路，促进海马中的神 高水平表达，激活经典Wnt信号通路，促进NSCs的增殖与分化。四逆散能明显提高 要表现为促进NSCs的迁移与分化。对比干细胞(SOs)与中医先天之精起源、作用和 发展规律，许多学者从多个角度发现这两种物质在人体中的作用相似，通过干细胞这 一视角对先天之精和肾是先天之精的内涵进行了讨论，干细胞的生理功能与中医的先 天之精十分相似，体内干细胞存在的形式与先天之精在体内存在形式也类似。干细胞 是一类具有自我更新、高度增殖和多分化潜能的细胞，具有无限分裂能力，能分化成 多种细胞，包括神经干细胞。慢性心理应激影响海马神经干细胞的增殖与分化，疏肝 解郁法治疗心理应激性病变，已被大量研究成果证实是一种有效的疗法，尤其是改善 应激反应对海马的损伤。 慢性心理应激损伤属于中医情志内伤病因的范畴，中医藏象理论认为，肝主疏泄 调畅气机对于调节人体的情志活动具有重要意义。因此，从海马神经干细胞增殖分化 角度研究肝主疏泄对慢性心理应激损伤海马的机制研究，从细胞水平深入阐明肝主疏 泄内涵，丰富中医肝藏象及情志病因理论，讨肝肾藏泄互用关系的实质，并为应用调 肝治法结合干细胞技术在临床上治疗重大疑难疾病提供理论与实验依据。 ‘ 方法： 取8周龄、SPF级、雄性、wistar成年大鼠为研究对象，采用慢性不可预知温和 应激(电击、夹尾、禁食、束缚、禁水、冰水游泳，倾斜，燥湿)建立慢性心理应激大 鼠模型。观察疏肝方药四逆散对慢性心理应激大鼠的体重，反映快感缺失的糖水消耗 实验，反映活动度和空间探索能力的旷场试验及反映学习记忆能力的水迷宫实验的影 响；通过电镜观察疏肝方药四逆散对慢性心理应激大鼠海马DG区突触数量及结构变 结果： (一)四逆散对慢性应激抑郁模型大鼠行为学的影响 2．糖水消耗实验：造模30d，空白组、氟西汀组、四逆散低剂量组糖水偏爱率高于模 型组(PO．05)。 3．旷场试验：①造模15d：：空白组总路程、平均速度、中央区停留时间高于模型组 (PO．05)。②造模30d，空白组、氟西汀组、四逆散中剂量组运动总路程、平均速度、 中央区停留时间、中央区路程高于模型组(PO．05) 4．水迷宫实验：定向航行潜伏期时间、空间探索120s穿越平台次数无统计学差异(P 0．05)。 (二)四逆散对海马DG区突触数量和超微结构的影响 电镜观察海马DG区的超微结构发现，空白组可见大鼠海马的突触体数量多、突 触结构大，细胞器如线粒体、高尔基体、内质网等结构清晰，突触后致密物相对较厚， 神经细胞之间树突形成，