BD多色流式全面解决方案-20150114中科院概述.pptxVIP

BD多色流式全面解决方案; Identification of immune cell subsets by eight?color antibody staining ;Nat Rev Immunol, 2012;多色方案中荧光素选择的重要性 荧光素同抗原的搭配 优化仪器配置，提高分辨率 多色Panel设计实例分析 ;流式多色方案中荧光素选择的重要性;V450;荧光素的选择是关键;荧光素分辨率等级;基于仪器配置选择荧光素;BD Horizon Brilliant? Violet;与其他染料的比较;Buffer Compatibility – Surface Stain;Buffer compatibility : intracellular staining;紫激光配置;BD Horizon Brilliant Ultraviolet (BUV);与其他染料的比较;BD Horizon Brilliant Blue (BB515);BB515 is up to seven times brighter than FITC;Better resolution of dim markers;荧光素同抗原的搭配;三大类: Primary: 很好鉴定，容易区分阴阳性细胞群，阴阳性峰分得很开 Examples: CD3, CD4, CD45 Secondary: 很好鉴定，较高水平表达，经常连续性表达 Examples: CD27, CD28, CD45RA, CD45RO Tertiary: 低水平表达，激活性marker，或者表达区分不明显 Example: CD25;在表达最低密度的抗原上匹配最亮的荧光素 抗原密度一定是在细胞亚群水平上确定的 这个规则会由于通道间相互溢漏，共表达等原因有所改变 抗原密度也会由于激活状态而有所改变 ;抗原和荧光素的组合;抗原共表达 ;优化仪器配置，提高分辨率;分辨率;分辨率 vs. 背景;染色指数: 分辨率的度量标准;流式细胞仪设置和跟踪(CST)系统;CST 系统的益处;仪器设置优化 PMT电压使弱荧光细胞的分辨率最大化;调整PMT电压以使分辨率 (SI)最大化;荧光溢漏;荧光溢漏的重要性;;单色对照;补偿对照 – 微球;多色Panel设计实例分析;依据 机器性能(光路配置) 分析中的生物学内在关系(目的细胞群，抗原密度和共表达) 选择的荧光素优先顺序(荧光亮度和通道间溢漏) 应用逻辑规则分配荧光素给特异性抗体 ;6色Treg细胞配色实例;举例1-遵循规则 根据抗原表达分配荧光素的原则来优化panel 举例2-最好的实践 进一步优化panel使Treg的分辨率最大化 抗原密度共表达 荧光素的亮度 由于通道间溢漏导致的分散程度;Fluorochrome;优化Panel设计来提高Treg的分辨率 ;6色T细胞Panel: 举例2;6色Panel中例1，例2结果比较;8色T细胞Panel设计;;方案1: 6色Panel优化到8色Panel;方案1 ;Fluorochrome;;8-Color Panels:例1和例2中的补偿;拓展8色panel到11色panel;;根据panel设计的规则得到最佳数据 根据机器配置选择荧光素 对抗原进行分类，在表达特性基础上分配荧光素 优化机器配置和补偿 Panel设计是一个反复的过程 决定一个panel是否是最佳的唯一办法是和相关对照一起上机检测 ;多色流式方案设计;让可得更多，可见更清晰 —多色流式 Thank you  judy_ma@