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动物室环境控制要求值 * 肿瘤学动物实验技能培训 2015年7月13日 一、常用实验动物及选择——品系选择 免疫功能重建，肿瘤学 与SCID相比，NK细胞减少 白色 NOD/SCID 人移植瘤实验 胸腺缺陷，T细胞缺陷 无毛 Nude BALB/c,裸鼠 同基因型肿瘤实验 野生型 白色 BALB/c 免疫功能重建，肿瘤细胞治疗 IL-2受体缺陷，与NOD/SCID相比，天然和获得性免疫缺陷更高 白色 NOG/NSG 免疫功能重建，肿瘤学 T、B细胞减少，细胞免疫和体液免疫缺陷，巨噬细胞和NK细胞正常 白色 SCID 同基因型肿瘤实验 野生型 黑色 C57BL 适合实验 免疫特性 毛色 名称 BALB/c C57BL 裸鼠 SCID NOD/SCID NOG/NSG 成年动物的年龄、体重和寿命比较 34 ＞13 ＞6 ＞4 ＞3 最高寿命（年） 13～17 5～6 ＞2 2～3 1～2 平均寿命（年） 8000～15000 2000～3500 350～600 200～280 20～28 成年体重（g） 250～360 120～180 90～120 85～110 65～90 成年日龄（天） 狗 兔 豚鼠 大鼠 小鼠 ? 一、常用实验动物及选择——年龄选择 一般购买6-8周小鼠，用于实验 二、小鼠的饲养——环境 微生物控制等级选择 普通级动物：示教、预实验 清洁级动物：适用大多数科研。 无特定病原体动物（SPF）：为理想的健康动物，适用于所有科研、检定。 无菌动物（GF）：适用于特殊研究。 无动物时（有动物时，除狗居外，不高于65分贝） 50分贝以下 噪音 20ppm以下 氨浓度 定时人工照明（分置小瓦数日光灯） 75～300lux 照明 100%新鲜空气（如使用循环空气，不应超过总空气量的1/3） 8～15次/小时 换气次数 避免直吹风 10～25cm/秒 气流速度 45～55% 湿度 按动物品种而有若干差别 21～27℃ 温度 备注 控制要求值 项目 二、小鼠的饲养——环境 动物饲养密度 动物饲养密度应符合卫生标准，有一定的活动面积，不能过分拥挤。 各种动物所需笼具的面积和体积因饲养目的而异，哺乳期所需面积较大，一般小鼠4-6只/笼。 二、小鼠的饲养——密度 二、小鼠的饲养——垫料、饲料、水 垫料、饲料均需经过辐照并密封包装。 水，自来水121度高压灭菌20min。 饲料选择营养均衡的配方饲料即可，特殊情况才选 择高蛋白，高脂肪饲料。 三、肿瘤建模 肿瘤模型类型：皮下移植瘤、肺转移模型、原位移植瘤； 查阅文献确定细胞接种浓度：一般1*106 个细胞左右； 预实验：以2倍比例选择三个细胞浓度开展预实验； 准备细胞：细胞重悬于PBS、生理盐水或基础培养基中，定量； 接种：皮下接种可选择乙醚麻醉，100 ul/位点；肺转移 尾静脉注射，用小鼠固定器，200ul/只； 对于皮下移植瘤，如需细胞数量较大，可以接种组织块儿； 皮下接种部位：Flank，背颈部，腋窝。 四、标记与分组 编号与标记方法 染色法 剪耳法 穿耳孔法 标牌法 烙印法 剪毛法 在每组动物不超过l0只或一个实验不超过40只的情况下适用 染色剂：3-5％苦味酸溶液，可染成黄色 染色法：单色涂染法 四、标记及分组——单色染色法 涂染原则：从左到右、从上到下 左前肢为1号、左侧腹部2号、左后肢3号， 两耳后部4号、背部5号、后肢背部6号， 右前肢7号、右侧腹部 8号、右后肢9号 头部为40号、尾巴根为10号。 方法步骤 四、标记及分组——单色染色法 在每组动物不超过100只的情况下适用 常用染色剂：3-5％苦味酸溶液，可染成黄色，作为“个”位数 常用染色剂：0.5%中性红或品红溶液，可染成红色，作为“十”位数 四、标记及分组——双色染色法 用两种颜色同时进行染色标记 用苦味酸(黄色)染色标记作为个位数，个位数的染色标记方法同单色涂染法 用品红(红色)染色标记作为十位数 四、标记及分组——双色染色法 方法步骤 左前肢为10号、 左侧腹部20号、左后肢30号 两耳后部40号、 背部50号、 后肢背部60号 右前肢70号、右侧腹部 80号、右后肢90号 第100号不作染色标记 方法步骤 穿耳孔法：用专用耳空器在动物耳朵不同部位打一小孔或缺口表示一定号码的方法。原则是：左耳代表十位，右耳代表个位。 标牌法：一般挂在动物的颈部、耳朵、脚上。 烙印法 剪毛法 四、标记及分组——其他方法