兽用疫苗生产与检验技术课程介绍.ppt

3）酶联免疫吸附试验抗原 将抗原或抗体吸附于固相载体，在载体上进行免疫酶染色，底物显色后用肉眼或分光光度计判定结果，包括直接法、间接法、双抗体夹心法、竞争法等。 4）中和试验抗原 中和试验是一种常用的诊断试验方法，既可用于定性试验，又可用于定量试验。既有固定血清—稀释病毒方法（?法），又有固定病毒—稀释血清（?法）。 5）免疫沉淀试验抗原 当可溶性抗原与其相应的抗体在溶液中或琼脂凝胶中扩散接触时，形成的抗原－抗体复合物成为肉眼可见的不溶性沉淀物，即为免疫沉淀反应。 某些细胞内寄生菌、病毒、真菌、寄生虫等，感染后可引起以细胞免疫为主的IV型变态反应。由于这种反应具有高度的特异性和敏感性，因此临床上常利用变态反应作为某些传染病的诊断方法。如鼻疽菌素、结核菌素、布氏菌水解素、提纯副结核菌素等。 基本技术路线包括：选择抗原性良好的菌（毒）株 ??? 生产用菌（毒）种的制备与鉴定??? 制备细菌抗原用培养基或制备病毒抗原用细胞或动物等原材料的选择??? 细菌（固体或液体）的培养或病毒液的繁殖、收获???抗原液的灭活 ??? 抗原的提纯、浓缩??? 除菌过滤 ??? 抗原的检验??? 抗原的分装与冻干???保存。 不同的微生物制备诊断抗原的方法不同，不同的抗原制备方法也有差异。有些抗原需要较复杂的工艺，如变态反应抗原、免疫沉淀试验抗原的制备往往需要提纯和浓缩抗原，以增加抗原反应的特异性和敏感性。中和试验抗原制备比较简单，一般不需提纯与浓缩。 诊断血清是一类含有特异性抗体、用于诊断或鉴定微生物的生物制剂，包括各种诊断血清、分群血清或分型血清等。 1、免疫动物的选择 制备免疫血清的动物多为家兔、豚鼠、马、牛、羊及鸡等。免疫前，须经确认无传染病并健康者方可使用。禽类血清有抗补体成分，在制备补体结合试验用抗血清时应选用哺乳动物。 2、免疫抗原的制备 制备免疫血清的抗原，多为微生物体或其毒素(类毒素)，或其提取物等纯化完全抗原。免疫抗原的提纯和浓缩，是制出高效价血清的先决条件。 免疫原注射多采用皮下或肌肉途径注射，大量抗原注射则以静脉途径较好，但抗毒素免疫则不采用静脉途径，应以背部多点注射为宜。 有一些用球蛋白抗原制备抗抗体血清时，须要加适当佐剂注射，如用弗氏完全或不完全佐剂，背部皮下多点注射，第一次免疫加完全佐剂，以后多次免疫只能使用不完全佐剂，隔7—10天加强免疫一次，可以获得较好的抗抗体血清。 最后一次大剂量注射抗原后8～10天进行第一次采血。采血量可按动物体重每公斤采10ml左右。动物采血应在上午空腹时进行，前一天下午不喂精料，只喂草料及水。3～4天后进行第二次采血。采血后3—5天再次注射大量抗原，如此循环进行采血及注射抗原。 1）免疫血清的检验：诊断用血清的检验主要是特异性、敏感性和效价的测定。作标记抗体用血清，免疫球蛋白含量应达到一定的绝对值。 2 ）免疫血清的标化：诊断用阳性血清，特别是分群血清和分型血清等，均须标化成为标准品或参考标准品，有些还须用国际标准品进行标化，定出国际单位(1U)。 标记抗体技术主要有荧光抗体技术、免疫酶组化染色技术、酶联免疫吸附试验、放射免疫测定、免疫胶体金技术等。 猪瘟荧光抗体的制备方法 将高免血清用饱和硫酸铵盐析法提取免疫球蛋白G（IgG），用2％（W/V）抗体蛋白液按80：1的重量比与异硫氰酸荧光素（FITC）在10?C左右结合6小时。通过SephadexG50柱层析，除去未结合的游离荧光素，测定荧光抗体染色效价和蛋白浓度，蛋白浓度不应超过0.125mg/ml为合格。 （一）兽用生物制品检验技术标准 1、兽用活疫苗检验技术标准： 物理性状：液体疫苗应无异物、摇不散的凝块、絮状物、霉团、变质；冻干疫苗无干缩、瓶破裂、瓶口密封不严。 纯粹检验：所有制品不应污染细菌、霉菌。病毒组织苗如有细菌污染，非病原菌每头份不超过1个；病毒性活疫苗不应污染支原体和外源病毒，尤其是明确规定禽源活疫苗必须用COFAL试验检测不应有禽白血病病毒的污染。 鉴别检验：应能被特异抗血清所中和。 安全检验：在专用动物舍进行，一般使用10个头份的疫苗进行,无论是本动物或非本动物进行的安全检验，必须全部符合规定。规定用多种动物进行安全检验的制品，任何一种动物结果不符合规定者，均判不合格。 效力检验：1）病毒滴定或细菌计数：应保证比最小免疫原性的数量大，且在规定的有效期内均不应低于规定标准。2）动物免疫方法：测定免疫动物的血清抗体或免疫攻毒进行判定。 水份测定：不应超过4%。 真空度测定：每瓶疫苗均应有真空。 物理性状：油乳剂灭活疫苗的外观应为乳白色均匀乳剂，单相苗 为油包水，双相苗为水包油包水剂型；37℃放置21天 不破乳；单相苗的粘度在10秒以内，双相苗的粘度在