动物的克隆(上课).ppt

一、动物细胞的培养和克隆的形成 1、动物细胞的培养 2005年4月,美国一家非官方癌症研究中心发布信息说,“高露洁”牙膏中含有的抗菌化学物质三氯生可能是致癌物质。公众对此表示怀疑。科研人员欲采用一定的技术手段探究三氯生对人体是否有危害。请回答： 1、根据所学的动物细胞工程知识，采取下列哪种技术手段最合适 A、动物细胞融合 B、动物细胞培养 C、胚胎移植 D、核移植 5、克隆培养法 单细胞不如群体细胞；原代培养细胞和有限细胞系不 如无限细胞系、转化细胞系和肿瘤细胞。 单克隆抗体 ——极富创造性的方案 单克隆抗体的应用 疾病诊断、治疗和预防——如单抗诊断盒 3、细胞核移植实验和动物的克隆繁殖： 胚胎细胞核的移植成功率远高于成体细胞。 细胞核移到无核卵 肠上皮细胞 囊胚 蝌蚪 1%~2% 用紫外线破坏未受精卵核 用紫外线破坏未受精卵核 细胞核移到无核卵 囊胚 囊胚 成蛙 50% 蝌蚪 借助精密的显微操作仪 和高效率的细胞融合法 1.囊胚内细胞团核+去核受精卵→重组细胞→囊胚 2.早期胚胎移植入同步孕鼠子宫 克隆鼠仔 苏格兰黑面母羊 白色芬兰母羊 乳腺细胞 营养限制性培养 取出双倍体核 除去核 卵细胞分裂 产下羊羔的核DNA与白色芬兰母羊相同 8细胞胚置入另一头苏格兰代孕黑面母羊子宫 克隆羊成功的分子细胞生物学机理： 体细胞克隆成功的意义： 1、证明了高度分化的细胞也可以回复到类似受 精卵时期的功能。 2、证明了细胞质具有调控细胞核发育的作用。 应用： 为遗传疾病的治疗、优良品种的培育等提供了重要途径；对濒危动物的保存也有重要意义。 重组移核细胞丢失了源于乳腺细胞的调节蛋白，经过三次分裂后，原乳腺细胞的调节蛋白便全部被卵细胞质中的蛋白因子替换了，因此核DNA被重新编排，细胞开始表达自己的基因。 细胞在贴壁生长过程中,随着细胞分裂,数量不断增加,最后形成一个单层,此时细胞间相互接触,细胞分裂和生长停止。 接触抑制 * * 低等动物细胞的全能性一般比较容易体现。癌细胞仍能逆转为正常细胞。 理论上是各种培养细胞 思考：离体的植物细胞和组织可以通过组织培养技术克隆成完整的植株，那么动物细胞和组织能否也进行同样的克隆？ 不能，动物细胞的全能性受到限制，到现在为止将离体的动物细胞直接克隆成个体还很困难，所以动物细胞和组织不能进行与植物一样的个体克隆。 动物克隆技术的基础：动物的细胞和组织培养 当一个人烧伤需要皮肤移植的时候,最好移植谁的? 1、自己 2、同卵双胞胎兄弟或姐妹 3、父母 4、一般兄弟或姐妹 5、其他人 √ 人耳鼠 幼龄动物 取动物器官 和组织 剪碎组织 胰蛋白酶处理 细胞培养 单个细胞 A、动物细胞培养的过程 动物胚胎或幼龄动物的组织、器官 细胞悬浮液 机械、胰蛋白酶消化？ 原代培养 传代培养 单个细胞 加培养液 分装成多个培养瓶 接触抑制 成分？ 1、细胞必须传代培养的原因？ 2、为什么要放在C02培养箱中培养？ 调节温度、PH等，模拟细胞或组织在生物体内的生长环境 胃蛋白酶? B、动物细胞培养条件 无菌、无毒环境 生长环境温度(37℃)、湿度(95%)、pH(7.2-7.4)、气体(O2 、CO2)等 营养条件 需要多种氨基酸，维生素，辅酶，核酸，嘌呤，嘧啶，激素和生长因子，其中多种成分可以由血清提供 原代培养 传代培养 细胞系 有限细胞系 无限（连续） 细胞系 恶性转化 细胞系 转化细胞系 筛选特殊性质或标记物的 单细胞增殖成的细胞群 　　　　－－－细胞株 有限细胞株 无限（连续） 细胞株 细胞株和细胞系的关系？ 2、细胞系、细胞株 胚胎或幼龄动物的脏器 单个细胞 机械消化、胰蛋白酶消化 原代培养 培养液 葡萄糖、氨基酸、无机盐、维生素、动物血清等 传代培养 细胞株或细胞系 某物质 检测有毒物质、致癌物质等 药物 研究治疗癌症的药物及其疗效 3、动物细胞培养的应用 2、根据上述选择，请你设计一个实验来探究“三氯生”对人体是否有危害。 （1）该实验的原理是 许多致畸物质加入动物细胞培养液后，培养细胞会发生染色体结构或数目的变异。根据变异细胞占观察培养细胞的百分数，可以判断某种物质的毒性 √ （2）实验方法步骤： ① 材料准备：从医院妇产科获得所需要的原始材料组织，浓度为0.09%的三氯生试剂,高倍显微镜,培养瓶若干,配置好的培养液,剪刀,培养箱,所需要的酶. ②制备检测细胞 ⅰ配置细胞悬浮液: ⅱ将细胞悬浮液分装到两个以上的培养瓶中,置于培养箱中培养一段时间. ③ 配置培养液:取两个培养瓶,分别编号1、2，