2.1微生物的实验室培养-(89张).pptVIP

三、实验操作 (一)制备牛肉膏蛋白胨培养基(用于培养细菌) 1.牛肉膏蛋白胨固体培养基配方 牛肉膏 5.0g 蛋白胨 10.0g NaCl 5.0g 琼脂 20.0g 将上述物质溶解后，添加自来水，定容至1000mL 2.制备牛肉膏蛋白胨培养基的步骤 （1）计算 （2）称量 （3）溶化:调PH值 （4）灭菌: 将锥形瓶放入高压蒸气灭菌锅，在压力为100kPa、温度为121℃，灭菌15～30min。 （5）.倒平板: 待培养基冷却到50℃左右时，在酒精灯附近倒平板。2d后观察平板，无杂菌污染才可用来接种。 倒平板技术 1.将灭过菌的培养皿放在火焰旁的桌面上，右手拿装有培养基的锥形瓶，左手拨出棉塞。 1 2 3 4 倒平板技术 2.右手拿锥形瓶，使瓶口迅速通过火焰。 1 2 3 4 倒平板技术 1 2 3 4 3.用左手的拇指和食指将培养皿打开一条稍大于瓶口的缝隙，右手将锥形瓶中的培养基(约10~20mL)倒入培养皿，左手立即盖上培养皿的皿盖。 倒平板技术 1 2 3 4 4.等待平板冷却凝固，大约需5~10min。然后，将平板倒过来放置，使皿盖在下，皿底在上。 1.培养基灭菌后，需要冷却到50 ℃左右时，才能用来倒平板。你用什么办法来估计培养基的温度？ 答：可以用手触摸盛有培养基的锥形瓶，感觉锥形瓶的温度下降到刚刚不烫手时，就可以进行倒平板了。 问题讨论 2.为什么需要使锥形瓶的瓶口通过火焰？ 答：通过灼烧灭菌，防止瓶口的微生物污染培养基。 3.平板冷凝后，为什么要将平板倒置？ 答：平板冷凝后，皿盖上会凝结水珠，凝固后的培养基表面的湿度也比较高，将平板倒置，既可以使培养基表面的水分更好地挥发，又可以防止皿盖上的水珠落入培养基，造成污染。 4.在倒平板的过程中，如果不小心将培养基溅在皿盖与皿底之间的部位，这个平板还能用来培养微生物吗？为什么？ 答：空气中的微生物可能在皿盖与皿底之间的培养基上滋生，因此最好不要用这个平板培养微生物。 9.关于制备牛肉膏蛋白胨固体培养基，叙述错误的是（ ） A. 操作顺序为计算、称量、溶化、倒平板、灭菌 B. 将称好的牛肉膏连同称量纸一同放入烧杯 C. 待培养基冷却至50℃左右时进行倒平板 D. 待平板冷却凝固约5~10min后将平板倒过来放置 A 10 ．有关倒平板的操作错误的是?（ ） Ａ．将灭过菌的培养皿放在火焰旁的桌面上 B?．使打开的锥形瓶瓶口迅速通过火焰 C?．将培养皿打开，培养皿盖倒放在桌子上 D?．等待平板冷却凝固后需要倒过来放置 C （二）纯化大肠杆菌 平板划线法和稀释涂布平板法 微生物的接种方法： 纯化的原理：在培养基上将细菌稀释 或分散成单个细胞，使其长成单个菌落，这个菌落就是一个纯化的细菌菌落 平板划线法 稀释涂布平板法 一旦划破，会造成划线不均匀，难以达到分离单菌落的目的； 二是存留在划破处的单个细胞无法形成规矩的菌落，菌落会沿着划破处生长，会形成一个条状的菌落。 1.为什么在操作的第一步以及每次划线之前都要灼烧接种环？在划线操作结束时，仍然需要灼烧接种环吗？为什么？ 答：操作的第一步灼烧接种环是为了避免接种环上可能存在的微生物污染培养物；每次划线前灼烧接种环是为了杀死上次划线结束后，接种环上残留的菌种，使下一次划线时，接种环上的菌种直接来源于上次划线的末端，从而通过划线次数的增加，使每次划线时菌种的数目逐渐减少，以便得到菌落。划线结束后灼烧接种环，能及时杀死接种环上残留的菌种，避免细菌污染环境和感染操作者。 2.在灼烧接种环之后，为什么要等其冷却后再进行划线？ 答：以免接种环温度太高，杀死菌种。 3.在作第二次以及其后的划线操作时，为什么总是从上一次划线的末端开始划线？ 答：划线后，线条末端细菌的数目比线条起始处要少，每次从上一次划线的末端开始，能使细菌的数目随着划线次数的增加而逐步减少，最终能得到由单个细菌繁殖而来的菌落。 11．下列有关平板划线接种法的操作错误的是 （ ） A．将接种环放在火焰上灼烧 B．将已冷却的接种环伸入菌液中蘸取一环液 C．蘸取菌液和划线要在火焰旁进行 D．划线时要将最后一区的划线与第一区的划线相连 D * * 专题2 :微生物的培养与应用 细菌的菌落 鉴定菌种的重要依据 1.何为培养基？ 3.不同的培养基有不同的配方，但是其基本成分都相同，都包括哪些营养元素？有何作用？请举例说明。 阅读教材P14~15相关内容，回答以下问题： 2.按照不同的培养基划分