Meisregulatespostnatalcardiomyocytecellcyclearrest说课.ppt

背景 背景 背景 Real-time PCR of Hox and Pbx family members gene expression at P1 vs P7 upregulation of3 of the 5 hox genes known to regulate Meis1 DNA binding and transcriptional activity. 结果1：Meis1在心肌发育和再生时的表达量 结果2：心肌发育过程中Meis1在细胞内位置变化 方法 体外siRNA敲除Meis1 Meis1 KO鼠 Meis1 iKO鼠 Meis1 OE鼠 结果1：Meis1在体外siRNA敲除新生小鼠心肌细胞中表达量 结果2：Meis1在Meis1 KO鼠心肌中表达量 结果2：Meis1 KO鼠心功检测 结果2：Meis1 KO鼠心肌细胞增殖与凋亡检测 Meis1 KO鼠成年后心功检测 结果3：Meis1在Meis1 iKO鼠心肌中表达量 结果3：Meis1 iKO鼠心功检测 结果3：Meis1 iKO鼠心肌细胞增殖与凋亡检测 结果4：Meis1在Meis1 OE鼠心肌中表达量 结果4：Meis1 OE鼠心功及细胞增殖检测 结果4：Meis1在Meis1 OE鼠心梗后表达量 结论 MEIS1是调节心肌细胞周期的关键。MEIS1的缺失有利于新生小鼠心肌细胞的增殖，而对于成人心脏中的心肌细胞的有丝分裂也是有利的，同时还对心脏的正常功能不产生影响。相反，MEIS1的过量表达会抑制心肌细胞的增殖和新生儿心脏的再生。Meis1有可能是作为一种成体心脏细胞分裂on/off开关。如果能获得成功，这种能力有可能会引领进入心力衰竭治疗的一个新时代。” Meis1调节细胞周期的机制 总结 精炼 完整 逻辑性好 心脏的大小和心功不受敲除Meis1的影响。然而，KO的心肌细胞比正常心肌细胞小，这就暗示KO鼠的心肌细胞数量多。（心肌细胞更小，但是心脏与体重比没有变化）。 M敲除导致心肌细胞增殖。我们发现M敲除鼠有肌节分解现象，肌节分解是心肌细胞增殖的一个重要标志，然而，临近心肌的却有正常的肌节结构。我们还发现胞浆分裂makerAB在KO鼠的增殖心肌间的卵裂沟中表达明显。为了证明敲除M是否能增加心肌细胞总体数量，我们用胶原消化的方法从WT和KO心脏中分裂出心肌细胞，发现KO鼠心肌细胞数量明显增加。并伴有单核心肌细胞百分率增加，双核心肌细胞减少也许象征着单核心肌数量增加，或者反映出有丝分裂的心肌细胞的核位置。这些结果证明M敲除即影响细胞周期的活性又影响出生后心肌细胞核。心肌细胞数量是否有实质性的增加不仅取决于增殖细胞数量与还要看凋亡细胞，通过tunol染色发现M敲除不会增加心肌细胞凋亡。 成年后这种作用会不会减弱呢？ 虽然从出生起就通过过表达细胞周期调控因子持续的使心肌细胞产生周期已经报道过，但是在一篇文献中报道过细胞周期在成年心肌重新启动被一部分单核心肌限制，其他学者报道细胞周期重新启动与收缩功能紊乱有关。三苯氧胺 有趣的是，用PH3染色发现有丝分裂心肌细胞增加了3倍，而且三苯氧胺处理一周后胞浆分裂明显增加，此外我们还发现，iKO鼠心脏心肌细胞数目增加，而且单核细胞数很高。最后我们没有检测到任何明显的凋亡。总之，最后证明在成年鼠中敲除M能够重启细胞周期。 LOGO LOGO Meis1 regulates postnatal cardiomyocyte cell cycle arrest nature 2013.5.4 韩月 4 3 2 1 Background Methods Results Discussion 药物保守治疗 冠状动脉介入治疗 心脏外科搭桥手术治疗 细胞移植 心肌组织工程 体外器官克隆 出生7天内 可再生 出生7天后 不可再生 Meis1的升高可能与细胞增殖停止有关。 Meis1在p4-p7时间段行使转录功能 mitosis marker pH3 Meis1敲除可使细胞增殖增加 Silencer Select Pre-designed siRNAs for Meis1 NC P14 已超过出生后心肌细胞周期阻滞的时间窗 crossing Meis1f/f mice with aMHC-Cre mice P14 心功不受敲除Meis1的影响 Meis1 KO鼠心肌细胞比正常心肌细胞小，但是心脏与体重比没有变化，间接说明Meis1 KO鼠心肌细胞数量多 mitosis marker pH3 cytokinesis marker Aurora B kinase Meis1 KO鼠使心肌细胞增殖增多且不会增加心肌细胞凋亡。 Inducible cardiomyocyte-specific deletion of Mei