胃癌的研究剖析.pptVIP

胃癌的研究进展 胃癌是源自胃粘膜上皮细胞的恶性肿瘤,占胃恶性肿瘤的95％。胃癌因其发病原理复杂，一直是危害人类健康最严重的一项疾病。 传统的治疗方法如手术、放疗、化疗，不仅对人体伤害极大，且都难以达到彻底根治的目的。 胃癌的基因治疗是指针对胃癌发生的遗传学背景，将外源性目的基因引入胃癌细胞或其他体细胞内以纠正过度活化或补偿缺陷的基因，从而达到治疗胃癌的目的治疗方法。 目前，胃癌基因治疗的主要途径包括：抑癌基因治疗，癌基因治疗，免疫基因治疗，药物敏感基因（自杀基因）治疗，多药耐药基因治疗，胃癌血管基因治疗等。 反意核酸技术 肿瘤的反义治疗就是根据碱基互补原理,利用与目标靶DNA 或RNA 特定互补的人工合成短链核苷酸片段在转录和翻译水平阻断某些异常基因的表达,使其专一性地抑制生物基因表达，以期阻断瘤细胞内的异常信号传导,使瘤细胞进入正常的分化途径或引起细胞凋亡,或抑制自分泌生长因子的分泌,封闭其受体以改变肿瘤的生物学特性达到治疗肿瘤的目的。 ? 因此，该技术目前主要的突破方向应该是寻找新的特异性更强的基因，同时使反义基因能够更长时间的存在于细胞之中。 ?　　Bcl-w是 bcl-2家族的一个新成员，其编码产物Bcl-w蛋白共有与bcl-2相同的抗细胞调亡、促进细胞存活的能力。这种基因能保护胃癌细胞，同时还能导致胃癌细胞扩散。人与小鼠间bcl-w有高度的同源性:99%氨基酸序列相同,94%的核酸序列相同。 　　　bcl-w定位于T细胞杭原受体(TCR)附近，中心部位位于人与小鼠14号染色体q11。 bcl-w在许多种细胞中表达，尤以在大脑，大肠和唾液腺中表达水平最高。Bcl-w有使几种细胞在不同细胞毒性抗原致敏下存活的能力。bcl-w表达增强可使淋巴细胞及骨髓细胞不易在致病条件下抗性增加。另外，Bcl-w蛋白在表达细胞中亦定位于胞浆。 经过讨论，我们决定采用“癌症疫苗”的方法，用病毒作为载体，将反义DNA（ASODN）导入正常胃细胞，一旦细胞癌变，ASODN可立即与突变癌基因结合，使其封闭。而在细胞处于正常的时期，ASDON将作为一段游离DNA长期存在于细胞核之中。由于没有启动子，所以ASDON不会发生转录，因此不会对细胞产生不利影响。 * * 反义寡核苷酸技术通常有两种作用方式，一方面设计合成寡脱氧核苷酸掺入基因组特异区域形成三股螺旋DNA(triplex，DNA)、D环(D-loop)或对转录因子的套圈作用，从而在复制或转录水平上抑制或封闭靶基因的表达；另一方面反义寡核苷酸则能与mRNA形成DNA·RNA双链结构激活细胞内固有的核糖核酸酶H(RNaseH)，特异降解杂交体中的mRNA从而十分有效的阻滞mRNA的翻译。 目前采用的反义寡核苷酸序列长度一般为15—20个核苷酸。理论上它具有与靶序列互补性很强、精确、高效以及广泛意义的调控特异基因表达的能力。 目前已经利用计算机辅助设计高效ASON，而且可用自动DNA／RNA合成仪方便合成ASON。ASON和RNA靶序列的属性很大程度上影响着ASON在活性细胞里面的效率，其影响因素主要分4个方面：(1)ASON特异核苷酸序列的内在属性；(2)对ASON的化学修饰；(3)靶RNA序列的结构特点；(4)DNA—RNA二聚体退火动力学以及二聚体的稳定性。因此，在利用计算机辅助设计和合成ASON时候应充分考虑这些影响因素，以达到消除其不稳定性、非特异性、不容易穿过细胞膜等因素的影响。 设计反义RNA基因是时应注意之点总结如下： 　　[1]长的反义RNA并不一定比短的反义RNA更为有效。　　[2]在原核生物中针对SD序列及其附近区域的反义RNA可能更有效。　　[3]在真核生物中，对应于5‘端非编码区的反义RNA可能比针对编码区的反义RNA更有效。　　[4]尽量避免在反义RNA分子中出现自我互补的二级结构。　　[5]设计的反义RNA分子中不应有AUG或开放读框，否则该反义RNA亦会与核糖体结合而影响其与靶mRNA的配对结合。　　[6]进一步还可以将带有ribozyme结构的RNA连在反义RNA的3‘端尾上，当反义RNA与靶mRNA杂交后，即可利用其酶活性来降解靶mRNA。 但目前用反义核酸技术治疗胃癌还存在以下问题： 胃癌是一种多基因遗传病,其发生发展存在多种癌基因的激活,而单一癌基因的反义阻断不可能完全抑制或逆转肿瘤的生长; 目前反义核酸对靶向特异性不强,很容易对靶细胞周围细胞产生非特异性的阻断; 同时尚未设计出有效的转运机制转运足够的反义寡核苷酸到靶细胞而达到长期逆转肿瘤的目的; 反义表达载体和反义寡核苷酸都存在体内迅速失活的问题,限制了反义基因疗法向临床应用的过渡。 另外， ASON或ASODN 在体内生理条件下，往容易被各种核酸酶降