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活化后的MPF有什么功能？ G2---M转换 诱导纺锤体装配； 促发染色体凝聚； 核被膜解体； 细胞骨架重排； 高尔基体重排； 细胞周期调控机制 驱动机制： 由多种不同的Cyclins和CDKs形成的复合物驱动。 监控机制： 主要由CDK抑制分子和抑癌基因组成。 早期蛙胚细胞增殖速度非常快，30min。主要差在G1期 Biotechnology * G. Podgorksi, Biol. 1010 * 依据细胞DNA含量（横坐标）来分析的。纵坐标Cell Number：即计数到的有效细胞数；2、横坐标DNA Content：即DNA量， G1期：细胞DNA复制还没有开始，也是DNA含量最少的，即流式检测结果图的第一个峰； S 期：细胞开始复制，到完成复制，是一个一倍DNA到二倍DNA的过程，在流式结果图中显示期跨度特别大（第二个不高但很宽的峰）； G2期：DNA复制完成至分裂的一段时间，此时细胞内含二倍DNA，在流式结果图中的第二个峰； M期：细胞分裂过程，此时细胞内也是二倍DNA，用DNA含量的方法是无法与G2期分开，所以有第三峰明显升高时报告：G2/M期阻。 Biotechnology * G. Podgorksi, Biol. 1010 * Biotechnology * G. Podgorksi, Biol. 1010 * 如果条件不满足，细胞就停留在G1期，叫做G0期细胞。G1期检验点决定了细胞能否进行增殖。通过了，后边相对顺利，细胞就增殖。 G2期快完的时候，决定是否进入M期时，有G2检验点。如果条件不满足，就停下来。 M期：核要分裂，细胞也要分裂。关键问题：什么时候遗传物质染色体要分离（中期）？所有染色体都和动粒相连才可以启动分离中后期转换。称纺锤体装配检验点。 Biotechnology * G. Podgorksi, Biol. 1010 * 可以称：成熟促进因子，促成熟因子，卵细胞成熟过程。 或有丝分裂促进因子，促有丝分裂因子。 Biotechnology * G. Podgorksi, Biol. 1010 * MPF概念的提出，功能的鉴定做了好几十年。HeLa细胞是人类历史第一个成功培养的动物细胞，人宫颈癌细胞。HeLa患宫颈癌的美国黑人妇女名、姓的缩写。 将HeLa细胞同步化在M期，和小鼠PtK2细胞间期不同时相的细胞进行融合，间期细胞染色体形态的变化。G1期细胞染色体提前凝聚，显微镜下可以观察到染色体，叫早熟凝聚染色体PCC,单线状。 S期，粉末状，也是染色体提前凝聚，形成PCC。G2期，形态更明显，比G1期的短，双线状。 Biotechnology * G. Podgorksi, Biol. 1010 * 非洲爪蟾卵母细胞，个体大，数量多，易于观察。卵细胞成熟过程非常有意思。很容易找到两个不同的时间点：间期G2，核大，M期，第二次减数分裂中期。 卵细胞在激素（孕酮）的刺激下，进入分裂期，经过两次减数分裂，成为成熟卵母细胞。受精后成为二倍体受精卵。 Biotechnology * G. Podgorksi, Biol. 1010 * 将M期的卵细胞的细胞质取样，注射进G2期细胞里，生发泡（核被膜）破裂，细胞顺利地从G2期进入到M期。没有激素作用。能促使卵细胞成熟。 将间期细胞的细胞质取样，注射，细胞仍然停留在间期G2期。 Biotechnology * G. Podgorksi, Biol. 1010 * MPF活性在细胞增殖过程中呈现明显的周期性波动。 Biotechnology * G. Podgorksi, Biol. 1010 * 做博士后时，研究裂殖酵母，获得了一些温度敏感性突变株（25度生长，37度不生长）。发现：有些酵母细胞还没长到正常一般大小时，就开始分裂增殖。称之为Wee（small,很小的意思）突变。Wee2基因后来被统一命名为细胞分裂周期2基因---CDC2。过表达cdc2基因，发现酵母细胞很小的时候就开始分裂增殖。缺失该基因，发现酵母细胞已经长的很大了，才进入裂殖。也就是酵母从间期进入分裂期的时间明显发生改变。 Biotechnology * G. Podgorksi, Biol. 1010 * 温度敏感型突变库，用质粒转化来获取新表型。质粒制备：提取总RNA反转录后，将cDNA连接到质粒上。转化突变型酵母细胞。有新表型出现的，能够顺利进行芽殖的酵母会长出来，顺利芽殖。再将这些带cDNA序列的质粒提取出来，进行分析。通过这样的方法找到了与细胞增殖、细胞周期有关的基因。 Biotechnology * G. Podgorksi, Biol. 1010 * 2. 细胞周期监控机制受损 主要原因：G1/S、G2