4-2 免疫血清制备及效价测定-4.pptVIP

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2016-06-18 发布于湖北
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免疫血清制备及效价测定（2）补体溶血反应法实验目的：了解补体在溶血反应中的作用熟悉抗血清效价测定方法掌握补体介导的细胞溶解机理实验原理：作为抗原的绵羊红细胞（sheep red blood cell，SRBC）与其对应抗体（溶血素）结合后，通过补体活化的经典途径激活补体，经过一系列放大的级联反应，最后形成膜攻击复合体（MAC），产生膜攻击作用，导致SRBC溶解，发生溶血反应。补体激活途径经典补体激活途径经典补体激活途径实验材料： 1. 1％ SRBC悬液 2. 阳性对照溶血素（抗绵羊红细胞抗体，适当稀释） 3. 豚鼠新鲜血清（当做补体用，临用前稀释成适当浓度） 4. 生理盐水 5. 试管架、试管、吸管、37℃水浴箱 6. 自制的小鼠抗SRBC抗血清摘取小鼠眼球放血：将小鼠抓出来，放在鼠笼盖上，用右手抓住尾巴，让它向前爬，用左手抓住耳朵及脑后毛皮，捏紧，使眼珠鼓出来，用小指和无名指压住鼠尾巴，小镊子夹住并迅速摘出眼球，将小鼠血收集入一洁净的平皿中。尔后，通过拉脱颈椎的方法将小鼠处死。操作步骤： 1）取洁净小试管12支，排列和做标记如下图所示； 2）分别在1、2、3号试管中加入生理盐水0.5、0.75、1.0ml； 3）将制备好的免疫血清进行1：20稀释，然后分别在1、2、3号试管中加入稀释好的免疫血清0.25ml； 4）依下图稀释血清； 1 3 2 4 5 6 7 8 9 10 11 12 加入生理盐水 0.5 ml 0.75 ml 1.0 ml 1:60 1:120 1:240 1:480 1:80 1:160 1:320 1:640 1:100 1:200 1:400 1:800 弃去 0.5 ml 弃去 0.25 ml 弃去 0.75 ml 0.25ml 0.25ml 0.25ml 0.25ml 0.25ml 0.25ml 0.25ml 0.25ml 0.25ml 弃去 0.25 ml 弃去 0.25 ml 弃去 0.25 ml 弃去 0.25 ml 弃去 0.25 ml 弃去 0.25 ml 4-12号管，每管加入生理盐水0.25ml 5）每管中：免疫血清0.25ml、1：30稀释的补体0.5ml、生理盐水0.5ml、1%SRBC 0.25ml； 6）另作一管，记为13号试管，加入1.25ml生理盐水和0.25ml的1%SRBC，作为阴性对照； 7）另作一管，记为14号试管，加入阳性对照溶血素0.25ml、 1：30稀释的补体0.5ml、生理盐水0.5ml、1%SRBC 0.25ml，作为阳性对照； 8）37oC水浴15-30min，观察结果。完全溶血不完全溶血无溶血(对照) 37oC水浴15-30min，观察结果。结果判定：观察溶血现象，以呈现完全溶血的血清最高稀释度为溶血素效价（ X 6 ）。 * * * *