英国药典关于赭曲霉素A的检测方法.docVIP

赭曲霉素A的检测方法 免疫亲和净化，液相色谱-荧光检测法（详见英国药典和欧洲药典） 方法 液相色(2.2.29) 溶液A：水：乙腈（V:V=80：20），水用无水甲酸pH值2.3 。 供试品溶液的制备： 向2.00 g的粉状药物(250)(2.9.12)加8030 g / L的碳酸氢钠溶液提取30(超声15)。冷却至室温,稀释到100.0(V1)，离心。取出5.0ml(Vi)的30 mlpH值7.4 缓冲溶液通过10 mL pH值7.4缓冲溶液然后,流速不超过5 ml/min, 使柱子保持5-10s的真空度或者使用注射器使空气进入柱子10s，将水挤出柱子，再用0.5 ml甲醇洗脱，并靠重力流下。 收集上述甲醇洗脱液，置4ml 玻璃瓶中，30s后然后再用0.5ml体积的甲醇洗脱，靠重力通过柱子，洗脱液置同一小瓶中。再过30s后，用0.5ml体积的甲醇洗脱。通过使空气进入柱子或者真空度收集残留在柱子上的溶液。在40℃用氮吹将收集液浓缩至干，用0.5ml(V2)的溶液A复溶残渣，如果溶液澄清则可以直接用于分析，否则则可以使用任意的过滤装置过滤，但是过滤装置不能吸附赭曲霉素A（比如0.45 um的聚四氟乙烯）。 赭曲霉素A一级储备液 用甲醇将1ml的赭曲霉素A溶液稀释到100ml，混合均匀。 赭曲霉素A二级储备液 用甲醇将10 ml的一级赭曲霉素A溶液稀释到100ml，混合均匀。 赭曲霉素A标准溶液 按照表2.8.22.-1 用适量赭曲霉素一级或二级储备液配制成以下不同浓度，并用溶液A定容到50 ml。 标准曲线 用赭曲霉素A标准溶液制备标曲，标曲范围包含了赭曲霉素A在中药中的浓度0.5-250 μg/kg，检查标准曲线，如果样品中赭曲霉素A的含量超出了标曲的范围那么供试品必须要稀释，稀释到赭曲霉素A的含量适合于所建立的标曲。 色谱柱：C18 15 mm×4.6mm 温度：45℃ 流动相：A相：水，用磷酸调PH值至2.3 B相：乙腈 流速： 0.8 mL/min. 检测：以荧光检测器检测，推荐可调检测器额波长为激发波长λex= 330nm，发射波长λem=460nm。 进样量： 20 μL 计算：计算标曲y = ax + b，赭曲霉素A的浓度（ng/ml）为X轴，响应值（S）为y轴。测定溶液中赭曲霉素A的浓度（C）相当于 按照公式 计算中药中赭曲霉素A的含量，以ng/kg计算。 m：试样的质量,单位为克(g); V1：样品稀释的终体积，单位为毫升(mL); Vi：样品用于免疫柱上样净化的体积，单位为毫升(mL); V2：复溶残渣的的溶剂体积，单位为毫升(mL); C:测得的溶液中赭曲霉毒素A的浓度,单位为纳克每毫升(ng/mL); 附录：实验室用玻璃容器的去污染程序 玻璃容器用甲醇洗刷以及浸泡在强次氯酸钠溶液中至少2h,，然后用水洗干净。