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实验四 小鼠精子畸形试验 目的 精子畸形试验是检测受试化学毒物能否破坏哺乳动物精子正常形态的实验方法。通过该实验，学习和掌握小鼠精子畸形试验的原理和步骤。 原理 小鼠精子畸形受基因控制，具有高度遗传性，许多常染色体及X、Y性染色体基因直接或间接地决定精子形态。 精子的畸形主要是指形态的异常，是决定精子形成的基因发生突变的结果。因此形态的改变提示有关基因及其蛋白质产物的改变。 器材和试剂 器材： 眼科剪、眼科镊、小平皿、显微镜、擦镜纸、带橡皮头吸管、载玻片、玻璃染缸 试剂 生理盐水、甲醇（分析纯）、环磷酰胺 操作步骤 动物 雄性小鼠6~8 周龄，体重20~30g 药物 环磷酰胺 剂量 环磷酰胺40mg/kg腹腔注射，每天 1次，连续5天 制 片 在第1次染毒后第4~5周，小鼠脱颈椎处死，剪开腹腔，分离并摘取双侧附睾，将附睾放入有约1mL生理盐水的小平皿中。 制 片 用眼科剪将附睾纵向剪1~2刀，用吸管将悬浮液轻轻吹打5-6次，静置3-5min； 用4层擦镜纸过滤除组织碎片，用胶头滴管吸取精子悬液，滴一滴于清洁载玻片上，均匀推片； 待玻片晾干后用甲醇固定5分钟，干燥。 镜 检 先用低倍镜粗检，找到背景清晰、精子重叠较少的部位，用高倍镜检查精子形态。每只小鼠检查精子1000条。 精子畸形：主要在头部，其次为尾部。畸形类型可分为无钩、香蕉形、双头、胖头、无定形、尾折叠、双尾等。 分别记录异常类型和数量，以便统计精子畸形率及精子畸形类型的构成比。 注意事项 判断双头、双尾畸形时，要注意与两条精子的部分重叠相鉴别，判断无定形时要与人为剪碎及折叠相鉴别。 使用的小鼠要健康，以免感染、体温增高等可能导致精子畸形率增高，造成假阳性结果。 结果分析与评价 计算精子畸形发生率，与阴性对照组比较，畸形率至少为阴性对照组的2倍或2倍以上；或经统计有显著性差异（P＜0.01），并有剂量反应关系。 一般阴性对照组的精子异常率为0.8％～3.4％。 * * 正常和畸形精子形状 40x