猪苓多糖分离提取工艺研究 毕业论文.docVIP

1 前 言 1.1猪苓形态概述 猪苓( Polyporusumbellatus ( Pers. ) Fr .), 又名猪屎苓、地乌桃、猪茯苓、猪灵芝.属于无褶菌目( Aphyllophorales)多孔菌科( Pohyporaceae ) 多孔菌属( Polyp or us)[ 1] , 猪苓的生长发育要经过担孢子、菌丝体、菌核和子实体四个阶段。担孢子成熟后从菌管中发射出来，遇到适宜的条件会萌发成菌丝（初生菌丝），然后在菌丝细胞内形成简单的横膈膜，多隔菌丝经锁状联合后形成双核菌丝，菌丝不断生长，生长到一定数量时交叉纠结成菌核[2]。菌核能贮存营养，环境不适时休眠，环境适宜或遇到蜜环菌就能萌生菌丝。每年春天，地温升高到约10℃，土壤含水量在30％～50％时，菌核便开始萌发。菌丝突破菌核表皮，不断增多形成菌球，进而长成白苓。随着夏季地温不断升高，白苓生长速度加快，并产生许多新分支。秋天地温降低，生长速度渐慢，白苓表皮颜色加深，在越冬后颜色变黄或灰黄色，即成“灰苓”。灰苓再经过一个冬季后会变成黑色，即“黑苓”。只要条件适宜，一年中的春、夏、秋三季，母苓上随时可以萌发出新生白苓[3]。所以，白苓、灰苓和黑苓实际上为生长年限不同(当年、次年、第三年)的猪苓菌核[4]。邢晓科等对猪苓菌核进行显微观察时，发现菌核分为表皮和髓质，髓质菌丝相互黏连、紧密交织而成，菌丝中还存在含晶细胞。郭顺星等研究发现菌核表皮由几层菌丝紧密排列而成，细胞壁加厚，细胞趋于木质化，主要起保持水分和防止有害微生物侵染的作用[5]。猪苓菌核在我国已有2 000 多年的用药历史, 其性平味甘,《本草纲目》有“开腠理，治淋肿，脚气,白浊带下，小便不利”的功效。生长在山林中柞树、枫树、桦树、槭树、橡树的根上，性喜松软凸起不易长草的土壤中，雨季常在凸起处生有一茎多头蘑菇状的子实体。夏秋条件适宜时，子实体从接近地表的菌核顶端长出[6]。子实体很大，肉质、有柄、多分枝、末端生圆形白色至浅褐色菌盖，一丛直径可达35cm。菌盖圆形，中部下凹近漏斗形，边缘内卷，被深色细鳞片，宽1~4cm。菌肉白色，孔面白色，干后草黄色。孔口圆形或破裂呈不规则齿状，延生，平均每毫米2-4个。子实体幼嫩时可食用，味道十分鲜美[8]。[14]。研究表明, 猪苓多糖是由B-1y3, B-1y 4 和B-1 y 6 葡萄糖苷键缩合而成的葡聚糖, 平均分子质量为10 000~ 70 000。猪苓多糖中含有大量的微量元素，微量元素是人体所需营养成分中的重要组成部分，是生命体消化过程中能量转换和组织构成的重要因素，例如铁是构成血红蛋白、肌红蛋白的必需成分，锌是人体多种酶的激活剂，参与唾液蛋白、视紫质的合成，是调节核糖核酸聚合酶的必须组成部分[15]。 猪苓多糖能显著降低肝脏中氧化脂质的含量, 清除自由基损伤, 提高细胞中超氧化物歧化酶和肝脏过氧化氢酶的活力, 对延缓组织细胞老化、保护机体抗老防衰十分有益具有解毒利水渗湿、抑制肿瘤、增强免疫力、保护肝脏、抗衰老、抗辐射等功效[16]。临床上猪苓多糖用于原发性肺癌、肝癌、子宫颈癌、鼻咽癌、食道癌和白血病等放化疗的辅助治疗,同时临床也可减轻化疗的某些不良反应[17]。 1.4猪苓多糖的研究动态 目前, 提取猪苓菌核胞内多糖的常用方法是热水煎煮法。近年来, 随着多糖浸提新技术的发展,研究者还发现, 超声波、微波、酶解等辅助处理技术, 也能卓有成效地促进胞内多糖的浸出。利用液体发酵技术生产猪苓菌丝,并从猪苓菌丝中提取多糖是一种较新的研究技术[18]。而且国内外有关以猪苓菌丝干粉为材料的多糖提取工艺研究尚比较少。本试验采用热水浸提法浸提菌丝体多糖。利用单因素水平对照试验, 分试验分别对影响猪苓液体发酵干菌丝多糖得率的主要因素进行进一步探索。 2 材料与方法 2.1 供试菌种 原料采用山西农大植物病理实验室提供的猪苓菌种。 2.2 仪器与试剂 2.2.1仪器 HVE-灭菌锅、GSP-9270MBE恒温培养箱、ZD-85A数显气浴恒温振动器、8002型温度控制仪 2.2.2试剂 无水乙醇, HCI, NaOH, 正丁醇, 95%乙醇, 氯仿, 硝酸银, 氨水等。 2.3 培养基配制 猪苓母种培养基:马铃薯（200g）,葡萄糖（20g）,琼脂粉KH2PO4 (5.0g), MgSO4·7H2O（3.0g）,VB1（0.lg） 液体培养基:马铃薯200g,葡萄糖20g ,酵母粉10g，蛋白胨6g， KH2PO4 5.0g, MgSO4·7H2O 3.0g, VB1 0.lg 2.4菌种繁殖　 从供试猪苓母种中用挑针挑取菌落边缘健壮的菌丝接种到猪苓母种的平板培养基上，在25.5°C培养15d备用。 2.5液体培养 将菌落边缘新生菌丝切下0.5cm2 的菌块,接种于猪苓液体培养基