重楼属植物遗传多样性的RSAP标记 毕业论文.doc

重楼属植物遗传多样性的RSAP标记 摘要： 研究重楼属植物DNA指纹图谱，初步探讨RSAP分子标记技术在重楼属植物遗传多样性研究上的应用。采用限制性位点扩增多态性(restriction site amplification polymorphism，RSAP)Genetic Diversity Analysis of Paris by RSAP Makers Abstract : Studies on DNA fingerprinting of 8 paris and application of restriction site amplification polymorphism(RSAP) to the identification of Paris. Sequence—related amplified polymorphism(SRAP)molecular markers were used to detect the genetic diversity of 7 accessions of Paris collected from TianQuan and BaoXing in Sichuan，and one from LiJiang in YunNan. The DNA fingerprinting of 8 species were generated by 18 primer combination screened from 45 primer combinations.8 accessions were clustered into 4 groups by genetic distance. Based on molecular biology methods of RSAP analysis,accurate molecular identification could be performed on traditional Chinese medicinal material plants in Paris,and provided molecular evidence for taxonomy and identification of different species in Paris. Key words ：Paris，RSAP，PAGE，clustering 重楼属（Paris）为多年生草木（Trillaceae）24个种，分布在远东地区的热带及温带地区，我国有19种，以西南各省区居多。重楼根茎匍匐状，茎单生，直立。叶4至多枚轮生，极少3，具叶柄，披针形到卵形，基部具3条主脉，为网状脉。花单生于叶轮之上，花被和雄蕊4数或更多含蚤休甙、蚤休士宁甙、生物碱、氨基酸等。对流感病毒有较强的抑制作用，对痢疾杆菌、副伤寒杆菌、沙门氏菌、副大肠杆菌、绿脓杆菌、金黄色葡萄球菌、溶血性链球菌、脑膜炎双球菌等有抑制作用。, 近年来被广泛用于许多中成药和新药的制作。 随着药物工厂化生产的发展,重楼被乱采滥掘,再加之不注意其保护和繁育,重楼自然资源面临着逐渐枯竭的危险。因此,无论是从药用植物种质资源的保存,还是从重楼植物资源的可持续利用来说,都需对重楼的遗传多样性作更深一步的探讨。商品重楼需求量增大, 野生资源急剧减少, 商品药材基原混乱, 药材品质不一, 寻找鉴定重楼药材的有效方法迫在眉睫[4]。 相关序列扩增多态性( sequence-related amplified polymorphism，SRAP) Li与Quiros【5】博士于2001年提出的。RSAP ( restriction site amplification polymorphism)即限制性位点扩增多态性,是通过简单PCR 反应,针对基因组内普遍存在的酶切位点来产生多态性标记。其RSAP的引物是依据SRAP ( sequence related amplified polymorphism)(序列相关扩增多态性) 的引物设计原理建立。使用1对17-18个碱基组成的引物序列, 5′端前12-14个碱基为没有特殊组成的填充序列, 3′端的选择性碱基为4-6个碱基组成的限制性内切酶的酶切位点序列。依据引物内 3端选择性碱基,即基因组内限制性内切酶位点的不同而产生多态性。该技术由杜晓华等首先在辣椒中建立，同时在苦瓜和水稻上作了验证[6]，乔利仙进一步应用RSAP标记对紫菜进行了遗传多态性分析[7]，李炎林[8]建立了红花檵木RSAP反应体系。张明科[9]对RSAP 标记技术新引物设计及其反应体系的优化研究。李娟【10】首次通过对几种重楼属植物进行过氧化物酶(POD)同工酶的测定比较得到重楼不同种、变种或变型间