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PAGE  微生物学实验报告 实验一 普通光学显微镜的使用及细菌染色与形态观察 第一部分：显微镜的使用 一、目的要求 1．熟悉普通光学显微镜的构造、油镜的使用原理和显微镜的维护方法。 2．学会正确使用油镜观察细菌的基本形态和特殊构造。 3．了解各种显微镜的主要特征。 二、实验原理 （一）光学显微镜的构造 微生物实验室中最常用的是普通光学显微镜，它的构造可分为机械部分和光学部分。 1、机械部分 普通复式光学显微镜的机械部分通常包括以下几个部分：目镜、镜筒、基座回转器、物镜、载物台、光圈、聚光器、光源、镜臂、细调节器、粗调节器等。 2、光学部分：目镜、物镜、聚光器、光圈、光源。 （二）放大倍数 标本首先经物镜放大，在目镜的焦距平面上形成一个实像，再经过目镜放大成最终的虚像。总的放大倍数是物镜放大倍数与目镜放大倍数的乘积。 物镜的放大倍数愈大，其工作距离（物镜镜头到标本片之间的距离）愈短，这时光圈就要打开得愈大。 显微镜的放大倍数 放大倍数总的放大倍数 低倍镜 高倍镜 油镜物镜 10× 45× 100×目镜 10× 10× 10× 100× 450× 1000×（三）分辨距离与分辨力 显微镜的性能受物镜的分辨距离或分辨力所限制。分辨距离即透镜所能分辨的两个物点之间的最小距离，分辨距离愈小，透镜的分辨力愈高，物像也就愈清晰。因此常以分辨距离来衡量显微镜的分辨力。 R=0.61λ/N.A 式中：R分辨距离； λ作用光的波长； N.A数值口径。 一些介质的折射率 介 质折射率空气 水 玻璃 香柏油1 13 55 1.56三、实验内容 材料：显微镜，香柏油，擦镜纸。 方法： 细菌很小，须使用油镜方可观察到。油镜是显微镜上最重要的部件之一，观察时与玻片非常接近，稍不小心即可压碎玻片，更严重的是损坏镜头，故必须极其仔细地学习油镜的使用方法： 1、为使低倍镜取得最适之光源，可将低倍镜头调节到离载物台约1cm的高度，将聚光器提高，光圈完全打开，然后调节电压旋钮至视野最合适。 滴一滴香柏油，固定于载物台上，用推动器调节到载物台正中。在双目侧视下，下旋粗调节器，使油镜头浸入油中几乎与标本片相接触。然后眼睛从目镜观察（如光线不足，可适当增大电源电压），徐徐上旋粗调节器至看到模糊物像之后，再用细调节器调节以使物像清晰。如镜头已离开油面还未看到物像，则再重新操作。 更换标本时应先提高油镜头，再更换玻片，切勿随意移动显微镜的位置。 油镜观察完毕后，按“显微镜保护”中（6）项处理。 最后将油镜各部分还原，聚光器下降，反光镜垂直于镜座，镜头转成八字形，以免与聚光器发生碰撞。 四、思考题 1、使用显微镜时为何调节下列构造？反光镜，光圈，聚光器，粗调节器，细调节器，镜头回转器。 答：聚光器的位置之升降可影响视野的明亮度，上升则视野明亮，下降则光线减弱。光圈的放大或缩小也可控制视野明亮程度。粗调节器和细调节器均是调节焦距的装置。镜头回转器为装置物镜和转换物镜之用。 2、使用不同放大倍数的物镜时，工作距离与光圈的关系。如何利用这一原理用好显微镜？ 答：物镜的放大倍数愈大，其工作距离（物镜镜头到标本片之间的距离）愈短。标本首先经物镜放大，在目镜的焦距平面上形成一个实像，再经过目镜放大成最终的虚像。总的放大倍数是物镜放大倍数与目镜放大倍数的乘积。 3、为何要选用与玻璃折射率相似的香柏油作为油镜的介质？油镜的原理是什么？ 答： HYPERLINK /search?word=%E9%A6%99%E6%9F%8F%E6%B2%B9fr=qb_search_expie=utf8 \t _blank 香柏油只在使用油镜头时（100倍 HYPERLINK /search?word=%E7%89%A9%E9%95%9Cfr=qb_search_expie=utf8 \t _blank 物镜）使用，因为当镜与装片之间的介质为空气时，由于空气（n= 1.52）的 HYPERLINK /search?word=%E6%8A%98%E5%B0%84%E7%8E%87fr=qb_search_expie=utf8 \t _blank 折射率不同，光线会发生折射，不仅使进入 HYPERLINK /search?word=%E7%89%A9%E9%95%9Cfr=qb_search_expie=utf8 \t _blank 物镜的光线减少，降低了视野的 HYPERLINK /search?word=%E7%85%A7%E6%98%8E%E5%BA%A6fr=qb_search_expie=utf8 \t _blank 照明度，而且会减少镜口角。当以 HYPERLINK /search?word=%E9%A6%99%E