饮料中细菌总数的测定.docVIP

实验 饮料中细菌总数的测定 一、目的要求 1、学习活菌计数的计数方法。 2、掌握食品细菌总数的测定报告方式。 二、实验原理 本实验采用平板计数技术测定细菌总数。细菌总数主要作为判定被检样污染程度的标志，是指1ml检样在肉膏蛋白胨琼脂培养基中，置37℃经24小时培养后，所生长的细菌菌落的总数。 平板菌落计数法是将待测样品经适当稀释之后，其中的微生物充分分散成单个细胞，取一定量的稀释样液接种到平板上，经过培养，由每个单细胞生长繁殖而形成肉眼可见的菌落，即一个单菌落应代表原样品中的一个单细胞。统计菌落数，根据其稀释倍数和取样接种量即可换算出样品中的含菌数。但是，由于待测样品往往不易完全分散成单个细胞，所以，长成的一个单菌落也可来自样品中的2～3或更多个细胞。因此平板菌落计数的结果往往偏低。为了清楚地阐述平板菌落计数的结果，现在已倾向使用菌落形成单位而不以绝对菌落数来表示样品的活菌含量。 三、实验器材 1、培养基：营养琼脂 2、器皿：已灭菌的平皿（9套/组），1ml吸管（6支/组），试管（15×150）（6/组）牛皮纸或报线绳）lml吸管插入吸取1∶10稀释液1ml注入含有9ml灭菌水的试管内，振摇试管，混合均匀，做成1∶100稀释液。 另取1ml灭菌吸管按上述操作顺序操作10倍递增稀释液，如此每递增稀释1次，即换用1支1ml灭菌吸管。 分别用该稀释度的移液管吸1ml稀释液注入灭菌平皿内，每个稀释度三个平皿。稀释液移入平皿后，应及时将凉至46℃的肉汤蛋白胨琼脂培养基（可放置50℃水浴保温），倾注入平皿内，约15ml，并迅速转动平皿使之混合均匀。 凝固后倒置于37℃培养箱中培养24h后取出，计算平皿内菌落数目。 2、菌落计数方法 （1）先计算相同稀释度的平均菌落数。若其中一个培养皿有较大片状菌苔生长时，则不应采用，而应以无片状菌苔生长的培养皿作为该稀释度的平均菌落数。若片状菌苔的大小不到培养皿的一半，而其余的一半菌落分布又很均匀时，则可将此一半的菌落数乘2以代表全培养皿的菌落数，然后再计算该稀释度的平均菌落数。 （2）首先选择平均菌落数在30～300之间的，当只有一个稀释度的平均菌落数符合此范围时，则以该平均菌落数乘其稀释倍数即为该水样的细菌总数。 （3）若有两个稀释度的平均菌落数均在30～300之间，则按两者菌落总数之比值来决定。若其比值小于2，应采取两者的平均数。若大于2，则取其中较小的菌落总数。 （4）若所有稀释度的平均菌落数均大于300，则应按稀释度最高的平均菌落数乘以稀释倍数。 （5）若所有稀释度的平均菌落数均小于30，则应按稀释度最低的平均菌落数乘以稀释倍数。 （6）若所有稀释度的平均菌落数均不在30—300之间，则以最近300或30的平均菌落数乘以稀释倍数。 例次 不同稀释度的平均菌落数 菌落总数 （个/ml） 报告方式 （个/ml） 备注 10-1 10-2 10-3 1 1365 164 20 16400 16400或1.6×104 两位以后的数字采取四舍五入的方法去掉 2 2760 295 46 37700 37750或3.8×104 3 2890 271 60 27100 27100或2.7×104 4 无法计数 1650 513 513000 513000或5.1×105 5 27 11 5 270 270或2.7×102 6 无法计数 305 12 30500 30500或3.1×104 表 1计算菌落总数方法举例 五、实验报告 1、作平皿内菌落计数时，可用肉眼观察，必要时用放大镜检查，以防遗漏。 细菌数/平板 1 2 3 平均 1 2 3 平均 1 2 3 平均 每毫升中的细菌数 ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? 根据试验结果，报告检测结果： 每1ml湖水中的细菌数是____________________________。 六、思考题 1、试比较平板菌落计数法和显微镜下直接计数法的优缺点及应用。 2、当你的平板上长出的菌落不是均匀分散的而是集中在一起时，你认为问题出在哪里? 2 备 课 用 纸