1-细胞生物学实验详解.ppt

实验内容 实验一、细胞的形态结构与显微测量 实验二、细胞生理活动的实验观察 实验三、细胞核与线粒体的分级分离 实验四、细胞分裂的形态观察 实验五、细胞原代培养 实验六、细胞计数及死活细胞的鉴定 实验七、综合设计性实验 实验一细胞的形态结构与显微测量 (一) 观察并了解细胞的基本形态。 (二)掌握临时制片和显微绘图的方法。 (三)了解显微测微尺的原理及使用方法 (一)材料： 人口腔上皮细胞(自取) 蛙血细胞涂片 人血涂片 单层柱状上皮细胞永久制片 骨骼肌纵切片 (二)器材： 载玻片 盖玻片 牙签 擦镜纸 吸水纸 纱布 永久制片 镜台测微尺 using of the microscope (I) Use of low objective lens (II) Use of high objective lens Structure of the microscope (一)临时制片——口腔上皮细胞标本的制备 取载玻片一张(揩净)→加一滴生理盐水→取材(口腔内颊部上皮细胞)→涂于生理盐水中→盖盖玻片→染色(甲基蓝)1’→观察 (二)显微测量 1．显微测量计 (1) 目镜测微尺 1.外形是一圆形玻片，装入目镜镜筒中。 用于测量标本用。 2.刻度标记0~100，实际分为200等份，每一个格的长度需用镜台测微尺标定。 (2) 镜台测微尺 1.外形是一载玻片，上有一带精细刻度的标尺。 2.总长度为1mm，分为100等份，每一个格的长度为0.01mm(10μm)。 (3)标定方法 ①将镜台测微尺置镜台上。 ②低倍下找到镜台测微尺，使之与目镜测微尺平行且左端对齐(0刻度重合)。 ③由左向右找到目镜测微尺与镜台测微尺重合的位点，分别记录两尺重合处的刻度，计算目镜测微尺每小格的长度。 (4)测量细胞并计算核质比 ①口腔上皮细胞标本片→低倍镜下选无重叠、伸展良好、结构完整的细胞→换高倍镜测量。 ②口腔上皮细胞为扁平形(近似椭圆形), 测细胞的长半径(直径)，短半径(直径)，计算细胞体积。以同样方法测核并计算核体积(或将核近似看作球形)。 ③按公式计算核质比。 (三)永久制片的观察 Observation of cell morphological structure human blood smear toad blood smear mouse small intestine pillar epidermal cell skeleton muscle slide 四、作业 1．绘制口腔上皮细胞(点线绘图法) 2．低倍镜、高倍镜下测微尺的标定方法及结果 3．计算核质比  实验二、细胞生理活动的实验观察 通过制片与观察加深理解细胞吞噬等生理活动 掌握死活细胞鉴别的原理及方法 1.材料：小白鼠 2.器材和仪器： 光学显微镜、2ml注射器、载玻片、盖玻片、解剖器材、滴管、牙签、吸水纸 3.试剂：1％鸡血悬液、6％淀粉肉汤、0.3％台盼兰、酵母悬液、生理盐水、0.2％亚甲基兰染液 （一）细胞的吞噬活动 （二）细胞活性的鉴定—酵母菌 白细胞是机体防御系统中能游走的单位。它分为粒细胞系、单核细胞系、淋巴系三类。 游走性、变形运动、趋化性、吞噬异物。 在白细胞中，以粒细胞、单核细胞的吞噬活动较强，故称此二类细胞为吞噬细胞。单核细胞由血液进入组织后逐渐演变成巨噬细胞。吞噬细胞主要靠吞噬来处理异物。 吞噬细胞首先由于趋化作用而向异物游走，然后伸出伪足包围异物，并发生内吞作用形成吞噬泡将异物吞入细胞，继而溶酶体与吞噬泡融合消化异物。 2.方法 a．实验前二天，每天向小鼠腹腔注射6％淀粉肉汤0.5～1ml(含O．3％台盼兰，起标记作用)，以刺激腹腔产生较多的巨噬细胞。 b．实验时，每组取一只经上述处理的小鼠，腹腔注射1％鸡血悬液0.5～1ml，注射后轻揉小鼠腹部以使红细胞悬液分散均匀。 c．1小时后，用颈椎脱位法处死小鼠，迅速剖开小鼠腹壁，向腹腔注入0.5ml～1ml生理盐水，用牙签轻轻搅拌使生理盐水与腹腔液混匀。 d．用注射器抽取腹腔液，滴片，然后盖上盖片。 e．镜检，高倍镜下画图记录所见结果。 在高倍镜下，数量较多、体积较大、圆型或不规则的细胞，其表面有许多似刺状的小突起（伪足），胞质中有许多数量不等的蓝色颗粒（为吞入的含台盼蓝淀粉肉汤形成的吞噬泡）即为吞噬细胞。 （二）细胞活性的鉴定—酵母菌 1.原理 许多酸性染料不易穿过活细胞的质膜进入细胞内，却能渗入死亡的细胞内，使其着色，以此来鉴别死活细胞。 2.方法 取酵母悬液一滴于洁净玻片上，滴一滴0.2％亚甲基蓝染液，加盖片，2分钟后于显微镜下观察细胞。 3.结果 死细胞被染