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绪论 植物组培的定义：在无菌条件下，将离体的植物器官、组织、细胞以及原生质体，培养在人工培养基上和人工控制的环境中，使其生长、分化、增殖，甚至长出新的植株的过程和技术。 组织培养的基本特点：无菌条件、离体的植物材料（外植体）、和人工培养基与培养环境。 植物组织培养的特点：①培养条件可以认为控制②生长周期短，繁殖率高③管理方便，利于工厂生产和自动化控制。 外植体：无菌条件下，离体培养于人工培养基上的、用于达到某种培养目的的原始植物材料。 培养基：根据植物营养原理和植物组织离体培养的要求而人工配置的营养基质，通常含有大量无机元素、微量无机元素、维生素、氨基酸、糖类、植物生长调节物质，以及其他如固化物、活性炭、天然提取的营养物等；水也是其重要和主要组成成分。 植物细胞的全能性：是指植物体的每个细胞都含有该植物全部的遗传信息，在适合的条件下，具有形成完整植株的能力。 全能性的3个含义：①植物细胞轮是体细胞还是生殖细胞均具有该物种的全套遗传信息②只有在适宜的条件下，植物细胞才能具有发育成完整植株的能力③事物每个细胞均具有发育成完整植株的能力。 细胞分化：由于细胞的分工而异导致细胞结构和功能的改变，或发育方式改变的过程。即细胞功能特化的过程。 植物组织活细胞离体培养中的形态发生有：器官发生或体细胞胚胎发生着两种途径形成再生植株。 脱分化：是指一个成熟的细胞回复到分化状态或胚性细胞状态的现象。即失去已分化细胞的典型特征。 再分化：是脱分化的分生细胞重新恢复细胞分化能力，沿着正常的发育途径，形成具有特定结构和功能的细胞。 再分化有2个途径实现：胚胎发生、直接分化器官，再形成植株。 探索阶段：20世纪初到30年代中 1838年，德国植物学家Schleiden发表《植物发生论》39年德国动物学家Schwann《关于动植物的结构和生长一致的研究》，两位科学家创立了细胞学说奠定了组织培养理论的基础 1898年德国植物学家Haberlandt开始设计用实验方法检验细胞学说，1902年提出，植物细胞全能性理论（针对高等植物的组织） 1904年Hanning通过实验证实全能性 1943年美国的White出版了《植物组织培养手册》，他是奠基人。 组培的设备和培养条件 实验室基本组成：①无菌操作室②化学实验室③培养室④细胞学观察室⑤暗室⑥驯化移栽室 实验室的设计：①选址 地点应选在安静、清洁，远离繁忙市区，且交通方便的城市近郊②分区布局 按照工艺流程顺序排列，即以组培苗生产环节循环为主线合理布局。设计中每个组成部分最好能按工作的自然程序连续排列③分区大小、比例及其产量预测 不计温度是面积，培养室与其余几个部分比例大致为3:2.培养架所占的面积按2/3计算④培养室的光照与温度控制 组培所需的基本仪器和设备：1.玻璃器皿①培养起码（试管、三角瓶、培养皿、果酱瓶或罐头瓶、太空玻璃杯）②承装容器（分注器、离心管、磨口瓶、滴瓶、锅具）③计量容器（容量瓶、移液管和移液枪、量筒）④其他玻璃器皿（称量瓶、酒精灯、玻璃棒）2.器械用具①镊子②剪刀③解剖刀④接种工具（接种针、接种钩、接种铲）⑤钻孔器⑥细菌过滤器⑦其他（酒精灯、pH计、电热灭菌器、磁力搅拌器、微波炉试管架、托盘等）3.仪器与设备①恒温箱、生化培养箱、光照培养箱、人工气候箱和植物生长箱②烘箱（洗80~100℃，灭菌150℃，干重分析80℃）③空调、加热器④灭菌设备（2个大气压约120℃保持10~20mins）⑤冰箱和冰柜⑥振荡和旋转培养器（低60~120/mins高120~250/mins，组培用100次/mins左右）⑦天平⑧酸度计⑨显微镜 水浴锅 蒸馏水制造装置 超净工作台 温度条件：大多数植物在23~32℃一般25±2℃低于15℃或高于35℃对植物的生长不利。 湿度条件：培养室的湿度一般在70%~80%;培养容器中的湿度为100% 光照条件：组培的光照强度一般在1000~5000lx，光诱导器官形成时，只需500~1000lx，这是为了提高今后出瓶种植到土壤或其他介质中的成活率，光质对愈伤组织的诱导、培养组织的增殖以及器官的分化都有明显的影响。 气体条件： 培养基的渗透压：糖对培养基的渗透压起决定性作用，因此调节渗透压常常从糖着手。糖不仅是渗透调节物质，还是培养基的碳源和能源，用糖多的原因。多属植物的适宜浓度为2%~6%。根分化所用糖浓度较低，一般为2%~3%。体细胞胚胎发生所用糖浓度较高，最高为15%。 培养基pH值：5.6~5.8基本能适应大多数植物培养的需求。 常用灭菌方法：物理方法是利用高温、射线等杀菌或滤膜过滤除菌等物理措施而实现无菌的目的，包括干热、湿热、射线处理、超声波、微波处理、流体过滤除菌、离心沉淀、大量无菌水反复冲洗等技术措施：化学方法是利用各种化学药剂对杂菌进行杀灭而实现无