鸡蛋中磺胺二甲嘧啶残留量的HPLC检测方法的建立 毕业论文.docVIP

鸡蛋中磺胺二甲嘧啶残留量的HPLC检测方法的建立 摘要：本文采用高效液相色谱法（HPLC）测定了鸡蛋中磺胺二甲嘧啶（SM2）的残留量。实验通过在鸡蛋样品中添加0、0.125、0.25、0.5ppm的SM2，再经过乙腈-氯仿混合溶液提取和硫酸钠溶液反萃取净化及正己烷去脂等处理后，选用紫外285nm的波长，HPLC测定,出峰时间在7min左右，标准曲线的相关系数为0.9996，SM2的回收率为56.7%-60.8%。在目前的检测条件下，检测不出鸡蛋中的SM2残留。 关键词：磺胺二甲嘧啶、鸡蛋、高效液相色谱 前言 鸡蛋是人们的主要食物之一，也是天然营养食品。它以营养丰富、易于吸收和价廉物美而深受消费者喜爱，鸡蛋的消费量在人民膳食结构中占有重要地位。但由于蛋鸡饲养业的集约化和追求蛋品的高生产率，造成在鸡蛋的生产过程和蛋鸡饲养中要使用一些药物来保障畜群的安全或拌入饲料以促进动物的生长及提高产量。 磺胺类药物（Sulfonamides，SAs）是一类人工合成的具有氨基苯磺胺基本结构的抗菌药。磺胺二甲嘧啶（SM2）为磺胺类药物之一，化学名称为对氨基-N-（4，6-二甲基-2-嘧啶基）苯磺酰胺，是一种广谱抗菌药，为白色结晶粉末，长期暴露于日光下，颜色会逐渐变黄，无臭，基本无味，相当稳定，微溶于水，易溶于乙醇和丙酮, 在氯仿和乙醚中几乎不溶解。由于它的化学结构和细菌的“生长物质”---对氨苯甲酸结构很相似，可通过与对氨苯甲酸竞争二氢叶酸合成酶，妨碍二氢叶酸的形成，最终影响细菌核蛋白的合成，从而达到抑制溶血性链球菌、肺炎球菌以及大肠杆菌等细菌的作用。养殖业用它控制或预防雏鸡自痢杆菌病、禽霍乱等细菌性疾病和球虫病。我国现行法规是允许使用的，并且规定药物混料的预防量按照0.2%加入，治疗量一般不允许超过0.5%，连续使用不宜超过7天。但是饲养者和饲料加工者的使用上可能存在不符合国家规范的问题，这就要求对食品和饲料中SM2的残留量进行检测。 李俊锁、李西旺等用高效液相色谱法对鸡肝中磺胺类药物多残留进行了分析[1]。 Aerts等采用低压恒流模式[2]、Tsai等采用化学发光高效液相色谱方法[3] 、Furusawa 等[4] 通过高效液相色谱自动检测肉、蛋、奶中的磺胺类药物。Muldoon 等采用单抗为基础的竞争抑制性酶联免疫反应(cELISA)检测鸡肝脏组织中SDM残留[5]。2002年，Furusawa等又通过高效液相色谱检测了孵化期母鸡鸡肉及鸡蛋形成过程中四种磺胺类药物SDZ、SOD、SMX、SQ[6]。 随着我国加入WTO以后和人们对食品安全认识的不断深入，为保障我国人民身体健康、对鸡蛋食品实施有效监控、应对国外的绿色壁垒，提升我国鸡蛋产品的市场竞争力、研究、建立鸡蛋中磺胺二甲嘧啶的检测方法意义重大。目前，在国内对鸡蛋中磺胺二甲嘧啶残留的检验还没有成熟的方法，还不具有做低压恒流模式和化学发光高效液相色谱的条件，因此，本实验参考出口肉中磺胺药物残留的HPLC检测方法，拟研究建立鸡蛋中磺胺二甲嘧啶的HPLC检测方法。 2. 材料与方法 2.1 实验材料 苏果超市购得南通大地公司产新鲜鸡蛋120个 2.2 药品与试剂 乙腈(色谱纯)、氯仿（分析纯，RA）、正己烷（RA）、无水硫酸钠（RA） 磺胺二甲基嘧啶(SM2，标准品含量为99.99%Sigma) 乙酸（37.6%） 2.2.1 SM2的储备液和标准工作液的配制 储备液：万分之一电子天平精确称取25mgSM2， 用乙腈溶解并定容到10ml容量瓶,混匀,浓度为2.5mg/ml。 标准工作溶液：临用前用乙腈的乙酸水溶液(乙腈：乙酸：水=18：1：81)稀释成工作液，浓度分别为0.05，0.125，0.25，0.50，25 ug/ml。注：乙腈：乙酸：水(18：1：81)为本实验中色谱仪所用流动相。 2.2.2 SM2的萃取液 10%硫酸钠水溶液（m/V） 2%硫酸钠水溶液（m/V） 乙腈:氯仿混合溶剂（10：1=V：V） 乙腈:氯仿混合溶剂（1：2=V：V）： 2.3 仪器与设备 高效液相色谱 美国Aglilent 1100S 台式高速离心机(Biofuge stratos) 美国Kendro 氮吹仪Nitrogen EVAPORATOR 美国Organomation Associates,Jnc 微型高速万能试样粉碎机 天津泰斯特仪器有限公司 1/万T-1000型电子天平 常熟双杰测试仪器厂 高速组织捣碎机 上海标本模型厂 旋涡混合器