分子诊断的临床应用资料讲解.ppt

肿瘤是由于遗传物质（肿瘤相关基因）发 生突变而导致的疾病。肿瘤相关基因的突变只 是增加了个体对肿瘤的易感性而并不一定马上 产生肿瘤，肿瘤的发生是一个多因素、多步骤 打击的过程。 实时定量RT-PCR技术在急性早幼粒细胞白血病中的应用 PML-RAR?融合基因是 APL特异的分子标志 初发APL的PML-RAR?融合基因的拷贝数均大于1000。 经全反式维甲酸、ATRA +化疗、三氧化二砷 治疗获得缓解后，其PML-RAR?融合基因的拷 贝数明显降低，并随着巩固治疗的进行而进一步降低。 长期无病生存的患者的PML-RAR?融合基因的拷贝数均长期低于200 一旦患者的检测值高于该值，则强烈提示复发的可能 复发 APL完全缓解和复发时 PML-RAR?融合基因的检测 CEA基因的定量检测 在监测胃肠癌微转移中的应用 CEA基因在消化系统上皮腺癌，尤其是直结肠癌和胃癌中高表达，而在正常成人体内极少表达。 正常人外周血CEA基因表达情况 在肿瘤发生血道转移时，外周血中有少量肿瘤细胞残留。在肿瘤细胞内可检测到CEA基因的转录本。 胃肠癌组织中CEA基因的表达 胃肠癌患者外周血中CEA基因的表达 用灵敏、特异的荧光定量PCR技术检测到这些肿瘤细胞中CEA基因的转录本，是发现肿瘤早期转移的关键。 人有了知识，就会具备各种分析能力， 明辨是非的能力。 所以我们要勤恳读书，广泛阅读， 古人说“书中自有黄金屋。 ”通过阅读科技书籍，我们能丰富知识， 培养逻辑思维能力； 通过阅读文学作品，我们能提高文学鉴赏水平， 培养文学情趣； 通过阅读报刊，我们能增长见识，扩大自己的知识面。 有许多书籍还能培养我们的道德情操， 给我们巨大的精神力量， 鼓舞我们前进。 * 片段性突变(fragememtal mutation) 核苷酸的丢失和增多 缺失：基因中硷基（遗传物质）的丢失 插入：外来基因片段插入某一基因序列中 倍增：基因内部某一段序列发生重复 基因重排：基因组中原来不在一起的基因由于某些原因组合排列在一起 动态性突变(dynamic mutation) 以三核苷酸为单位的重复序列在传递过程中 不稳定，会发生扩展，即子代的重复次数往 往较亲代大为增加，因此又称动态性突变。 脆性X综合征：CGG重复 少年脊髓型共济失调：GAA重复 亨廷顿病：CAG重复 X染色体（xq27.3）的脆性位点 脆性X综合征是遗传性智力缺陷最常见的一种。 致病基因FMR-1的5’端有CGG三核苷酸重复区。 普通男性群体中的患病率为1/4000。 普通女性群体中的患病率为1/6000。 患者智力低下、语言障碍、行为异常、呈特殊 面容。 正常个体：CGG重复次数6~52次，中国人群以(CGG)28为多见。 前突变(premutation)： (CGG) 53~230为携带者，虽表型正常，但在传 递过程中易发生进一步扩展，使后代的CGG重复次数大大增加，并 有异常表型。 全突变： (CGG) ≥230时，100%的男性表现为典型的脆性X综合征, 53%的女性表现为程度不同的智力低下。 遗传性疾病基因诊断的策略 （一）直接诊断策略 基因诊断的直接策略是通过各种分子生物学技术检测基因的遗传缺陷，因此直接诊断的前提是被检测基因的正常序列和结构必须被阐明。 直接诊断由于是直接揭示遗传缺陷，因而比较可靠。 DMD的基因检测 Duchenne muscular dystrophy (DMD) 是一种高发病率、高致残、高致死的X连锁的遗传性疾病，在3500个活产男婴中即有一个患者。 DMD基因的全长为250kb，有79个外显子。 DMD 的最主要遗传缺陷是外显子缺失，约占 60%～70%。 DMD基因外显子的检测 （二）间接诊断策略 间接诊断的实质是在家系中进行连锁分析，通过分析可确定个体来自双亲的同源染色体中的哪一条为致病染色体，从而判断该个体是否带有致病基因。 间接诊断不是寻找 DNA 的遗传缺陷，而是通过分析DNA的遗传标记的多态性估计被检者患病的可能性。 间接诊断：分析DNA的遗传标记的多态性 双等位基因(bi-allele）多态性： 限制性片段长度多态性（RFLP） 第一代DNA遗传标记，所含信息量有限。 检测技术：Southern印迹技术 多等位基因多态性(multi-allele) 小卫星序列 又称串联重复可变数目（variable number tandem repeats，V