核酸凝胶电泳要点详解.ppt

* Palindrome, Restriction Enzyme, Sticky Ends GAATTC GAATTC G AATTC G AATTC Sticky Ends (Cohesive Ends) EcoRI Madam Get An Apple To The Class G AATTC G AATTC Mice run faster through the forest than elephants“ 带电粒子在电场中向与自身带相反电荷的电极移动的现象 电 泳 electrophoresis 带电粒子在电场中的迁移速度叫迁移率，它同电场强度和本身所携带的净电荷数成正比，也与电泳分子的大小、构型、形状等因素有关。 DNA分型、DNA序列分析、限制酶切分析以及限制酶作图等的技术基础。 凝胶电泳 Gel electrophoresis Hydrolysis of DNA by restriction enzymes produces a mixture of DNA fragments 生理条件下，核酸分子中的磷酸基团是离子化的，DNA和RNA呈多聚阴离子状态（Polyanions）。  DNA、RNA放到电场中，由负极→正极移动。 大小、构型不同的核酸分子迁移率不同，因而在电场中被分离。 琼脂糖凝胶分辨DNA片段的范围为o．2— 50 kb 聚丙烯酰胺凝胶分辨范围为1个---1000 bp 凝胶浓度越高，介质孔隙越小，分辨力越强，反之。 凝胶的分辨能力同凝胶的类型和浓度有关 凝胶电泳中加入溴化乙锭（EB ethidium bromide ）染色，核酸分子在紫外光下发出荧光，肉眼能看DNA所形成的条带。 EB是一种核酸染料。当凝胶浸泡在含EB的溶液，或EB直接加到凝胶中，EB同DNA分子结合，在紫外光照射下，只有DNA分子通过放射荧光而变成可见的谱带。荧光的强度是同DNA片段的大小(或数量)成正比。 *