甘油含量测定.doc

嗯。你都问到这个问题了，具体仪器、操作什么的我就不说了。就说一下思路。 强碱条件下甘油和二价铜的络合物显绛蓝色，所以利用甘油的这个特性就可以轻松搞定。 主要试剂是AR级的甘油、氢氧化钠、硫酸铜。 向氢氧化钠碱化的甘油溶液里加硫酸铜，一定要保证甘油被完全络合，并且保证多余的二价铜都以氢氧化铜沉淀形式存在，但是氢氧化钠也不要加太多。 甘油铜可见区最大吸收波长是在630nm。 先作个标准系列，绘出吸光度-浓度曲线，然后把待测试样吸光度测出来在标准曲线上一算，浓度就得到了。 氢氧化铜解离出来的铜离子在630nm处也有吸收，好在它是一个定值，测出来后从每个甘油的A里面扣掉就行了。 甘油含量化学方法有很多，比色法，滴定法．甘油在强碱性条件下，与Cu2+定量形成绛蓝色的甘油铜溶液。根据朗伯-比尔定律，溶液吸光度A与吸光物质浓度C成正比：A=kC。甘油配制浓度C1与衍生的分析甘油铜浓度C有如下关系：C=k1C1，k1为稀释系数，则吸光度值与甘油配制浓度有如下正比关系：A=kk1C1+ε，k、k1为常数，ε为系统误差。先根据吸光度与甘油配制浓度C1做出关系曲线:，然后确定最佳线性拟合范围，最终得出拟合线性方程，程序化后，用于甘油含量的快速测定。 [供应] 拜发甘油检测试剂盒 ?发布日期：2010-9-21 ?截止日期：2009-5-9 拜发甘油检测试剂盒（酶学试剂盒）?订货号： 10148270035产品名称： 甘油（Glycerol?）产品英文名称： Glycerol包装： Ca.3?x?11?tests产品介绍： 如下产品说明： Glycerol?（用于检测食品中的甘油）?酶法分析试剂盒（紫外分光光度法）RIDASCREEN（产品编号：0?414?433）??????30次检测?1.?简介酶法分析试剂盒（紫外分光光度法）此法适用于检测食品（啤酒、葡萄汁、醋、蜂蜜、酒精、果酒）、化妆品、药品（溶液、栓剂）、纸板、烟草及生物制品中的甘油。2.??原理甘油在甘油激酶的催化下可被ATP磷酸化为3-磷酸甘油酯，ATP转化为ADP；?反应式为????????????????GKGlycerol﹢ATP???????????L-glycerol-3-phosphate﹢ADP上式中形成的ADP在丙酮酸激酶的催化下可与PEP作用下生成ATP及丙酮酸酯；?反应式为???????????PKADP﹢PEP??????????ATP﹢Pyruvate丙酮酸酯在L-乳酸酯脱氢酶的作用下可被NADH还原为L-乳酸酯，NADH被氧化为NAD；?反应式为??????????????????L-LDHPyruvate﹢NADH﹢H﹢???????L-lactate﹢NAD﹢被氧化的NADH的量取决于甘油的量，NADH的吸光度值可在334，340及365nm下测量。3.??试剂盒内容物－－－－瓶1共有3瓶，每瓶约有2g辅酶及缓冲液的混和物，包括：甘氨酰甘氨酸缓冲液，?PH约7.4；?NADH约7mg；ATP约22mg；PEP-CHA约11mg；硫酸镁－－－－瓶2约0.4ml悬浮物，包括：丙酮酸激酶，约240U；?L-乳酸酯脱氢酶，约220U－－－－瓶3约0.4ml甘油激酶悬浮物，约34U－－－－瓶4为甘油检测对照溶液（甘油检测对照溶液可不需要计算结果），此溶液使用时不需稀释。（效期见标签）4.??检测溶液的制备?（10次）－－－－取出1瓶瓶1，?用11ml重蒸水溶解，使用时此溶液需在20-25℃持续回温约10分钟－－－－瓶?2不需稀释－－－－瓶?3不需稀释5.??操作者应该注意之事项使用前请仔细阅读，中文翻译件仅供参考－－－－瓶1约含500mg碳酸钠，应避免接触皮肤和呼吸器官，其他用于甘油检测的试剂不具有危险性－－－－实验之后，用过的试剂可作为实验室废料处理，但必须在当地法规允许的前提下6.??储存条件－－－－瓶?1在2-8℃下保存（见标签），溶液1在2-8℃下可保存4天，溶液1使用前需回温至20-25℃－－－－瓶2及3在2-8℃下保存（见标签）7.??样品处理－－－－直接取用无色，透明，中性的溶液或按稀释表格稀释后进行检测，体积为2.000ml－－－－过滤混浊溶液－－－－除去样品溶液中的二氧化碳气体－－－－加入氢氧化钠或氢氧化钾来调节酸溶液的PH值约为8－－－－对于深颜色的样品溶液可不需稀释或者用PVPP或酰胺配成较高浓度的溶液如：1g/100ml－－－－粉碎或均质固体和半固体样品，用水抽提或溶解，而后过滤，通过Carrez澄清液可脱去其中的混浊物或色素－－－－用Carrez试剂可脱去样品中的蛋白质－－－－用热水抽提样品中的脂肪（抽提温度需在脂肪的溶解度之上）