菊花的组织培养二MicrosoftPowerPoint幻灯片讲义.pptVIP

制备MS固体培养基 接种后的锥形瓶最好放在无菌箱中培养，培养期间应定期消毒 培养温度控制在18-22℃ 每日用日光灯光照12h 结果分析与评价 一、对接种操作中污染情况的分析 接种3～4天后，在接种操作中被杂菌污染的培养物会表现出被污染的现象。 一般情况下，细菌的污染可能是由接种人员造成的，如未戴口罩，接种时说话或手及器械消毒不严等。真菌污染可能是植物材料消毒不当造成的。 结果分析与评价 二、是否完成了对植物组织的脱分化和再分化 观察实验结果，看看是否培养出了愈伤组织，记录多长时间长出愈伤组织。统计更换培养基后愈伤组织进一步分化成根和芽的比例和时间。 结果分析与评价 三、是否进行了统计、对照与记录 做好统计和对照，填好结果记录表，培养严谨的科学态度。从实验的第一步开始就做好实验记录，分析分组配制不同的培养基，然后做不同配方的比较。 结果分析与评价 四、生根苗的移栽是否合格 生根苗移栽技术的关键是既要充分清洗根系表面的培养基，又不能伤及根系。一般使用无土栽培的办法。培养基质要提前消毒，可以向培养基质喷洒质量分数为5%的高锰酸钾，并用塑料薄膜覆盖12小时。掀开塑料薄膜24小时后才能移栽。新移栽的组培苗要在温室过渡几天，等壮苗后再移植到大田或进行盆栽。 本课题内容小结 * 菊花的组织培养 菊花的组织培养 外植体消毒 接种 培养 移栽 栽培 实验操作： （一）制备MS固体培养基： MS培养基包括20多种营养成分，实验室一般使用4℃保存配制好的培养基母液来制备。 1、配制各种母液： 2、配制培养基：计算-称量-熔化-调pH-分装 #由于菊花的茎段的组织培养比较容易，因此不必添加植物激素 3、灭菌 问题：高等植物是光能自养型生物，为什么在植物组织培养过程中还需提供有机培养基和植物激素？ 1、选材：未开花植株茎上部新生的侧枝或生长旺盛的嫩枝 （二）外植体消毒 2、消毒 ②菊花茎段的消毒：流水冲洗- 酒精处理（70%、6～7S、2～3次）-无菌水冲洗-氯化汞处理（0.1%、1～2min）-无菌水至少处理3次 作业：P36在选取菊花茎段是，为什么要选取生长旺盛的嫩枝？ 外植体的生理状态是成功进行组织培养的重要条件之一。生长旺盛的嫩枝生理状况好，容易诱导脱分化和再分化。 ①对外植体进行表面消毒时，既要考考虑药剂的消毒效果， 又要考虑植物的耐受能力。不同药剂、不同植物材料，甚至 不同的器官要区别对待。 （三）接种： 接种前用体积分数为70％的酒精将工作台擦拭一遍，然后点燃酒精灯。因为污染的主要来源是空气中的细菌和孢子。 1．接种室消毒： 2．无菌操作要求： 所有的接种操作都必须在酒精灯火焰旁完成，每次使用器械后，都需要用火焰灼烧灭菌。 3．材料的切取和接种： 将消过毒的菊花茎段在无菌培养皿中切成0.5～1cm的小段，用镊子夹取菊花茎段接种。 4．接种注意事项： ① 每接种一块外植体前，镊子需放入体积分数为 70％的酒精溶液中消毒一次，然后在酒精灯火 焰上烧一遍，冷却后再接种。 ② 外植体在培养基中要分布均匀，放置外植 体数量根据锥形瓶的大小确定，一般胡萝 卜3～4块，菊花6～8块，也不要太少，以 充分利用培养基中的营养成分和光照条件。 ③ 插入时应注意茎段方向，形态学上端朝上， 形态学下端朝下，不要倒插。茎段、茎尖 基部插入培养基利于吸收水分和养分。 思考：你打算做几组重复？你打算设置对照实验吗？ 答：每种材料或配方至少要做一组以上的重复。设置对照实验可以取用一个经过灭菌的装有培养基的锥形瓶，与接种操作后的锥形瓶一同培养，用以说明培养基制作合格，没有被杂菌污染。 正常苗 污染苗 1、外植体带菌 2、培养基及接种器具灭菌不彻底 3、接种操作时带入 4、环境不清洁 污染途径 污染的预防措施 （一）防止外植体带菌 （二）保证培养基及接种器具彻底灭菌 （三）操作人员严格遵守无菌操作规程 （四）保证接种与培养环境清洁 1、培养基的灭菌（高压蒸汽灭菌） 2、外植体的消毒（酒精、氯化汞） 3、接种的无菌操作（酒精、酒精灯——灼烧） 4、无菌箱中的培养； 5、移栽到消过毒的环境中生存一段时间。 在整个操作过程中，是如何来实现无菌环境的？ （四）培养 （五）移栽 操作：打开封口膜-清洗转移-移栽 试管苗在移栽前进行一系列操作，使幼苗生长健壮，耐环境变化能力增强，这一过程叫炼苗。 珍珠岩： 珍珠岩是一种火山喷发的酸性熔岩，经急剧冷却而成的玻璃质岩石，有弧形或圆形裂隙，如珍珠的结构，所以被命名为珍珠岩 。 蛭石： 是一种天然、无毒的矿物质，在高温作用下会膨胀的矿物。它是一种比较少见的矿物，属于