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第五讲2 中药及其制剂定量分析的方法学 一、提取方法的选择 由于在提取过程中参与因素较多，所以一般以正交设计试验筛选提取条件。 (1)提取方式 (2)浸泡时间 (3)提取时间 二、分析方法的选择 用于中药含量的测定方法很多，在选用分析方法时，要根据被测成分的性质、干扰成分的性质等因素进行综合考虑。另外还要考虑方法的灵敏性、准确性和普及性。 中药制剂含量测定大多需用对照品。 (1)国家标准收载的含量测定用对照品 (2)国家标准收载的定性鉴别用对照品 (3)自制对照品，需经过结构确认、纯度检查和含量测定等几个步骤。 三、测定条件的选择 选择的原则要根据仪器性能和测试方法进行选择 如化学分析中指示剂种类、指示剂用量及终点颜色的选择； 可见分光光度法中显色剂种类、最大吸收波长、显色剂用量、最佳pH值、最佳显色温度、最佳显色时间及线性范围的选择； 紫外分光光度法中最佳pH值、最大吸收波长及吸收系数的测定等； 薄层扫描法中展开剂选择、显色剂选样、检测方式选择、最大吸收波长选择、仪器的线性比参数选择、测定方式、狭缝宽度、扫描宽度、灵敏度等； 气相色谱法中固定相选择、检测器选择、内标物选择、柱效的测定、分离度测定等； 高效液相色谱法中固定相选择、流动相选择、检测器选择、最大吸收波长选择（紫外检测器）、内标物选择、柱效的测定、分离度测定等。 四、线性范围试验 线性范围试验的意义 范围试验目的有以下三种。 (1)确定样品浓度或样品量与响应值是否呈线性关系 (2)确定样品浓度或样品量的线性范围 (3)考察标标准曲线是否通过原点，以便确定采用一点法或二点法定量相关系数r 五、稳定性试验 六、精密度试验 RSD (七、重复性试验) 八、耐用性试验 九、灵敏度 分析方法的灵敏度是指单位浓度（或量）与响应值的比值。 检测限：以信噪比来确定检测限的最低水平。 十、空白试验 空白试验是消除测定过程中系统误差的一个重要手段。空白试验是在不加试样的情况下，按照试样的分析步骤和条件而进行分析的试验。在中药制剂分析中，因为常常是测量成药中某一味中药中的某一比学成分，要想得到真正的“空白”比较困难。所以常用阴性对照法。 十一、回收率 1．加样回收率 即于已知被测成分含量的成药中再精密加入一定量的被测成分纯品 2．以成药空白所做的加样回收率 在成药空白(即除去欲测成分的药材后制成的成药)中加入一定量的被测纯品,依法测定。 示例 治伤软膏中苦参碱的含量测定 ■ 苦参为豆科植物苦参Sophora flavescens Ait.的干燥根，具有清热燥湿，杀虫，利尿的功效。苦参中主要含生物碱类成分，有：苦参碱(Matrine)、氧化苦参碱(Oxymatrine)、槐定碱 (Sophoridine)、槐果碱(Sophocarpine)、氧化槐果碱(Oxysophocarpine)等 ■ 本研究建立了HPLC法测定治伤软膏中苦参碱的含量，以控制治伤软膏的质量。 1．试剂和仪器 ■ Shimadzu LC-2010CHT高效液相色谱仪；CLASS-VP V6.14色谱工作站（日本岛津公司） ■ 苦参碱对照品（供含量测定用），批号110805-200306；氧化苦参碱，批号110780-200306；槐定碱，批号110734-200303；氧化苦参碱，批号111652-200301，均购自中国药品生物制品检定所； ■ 槐果碱，成都曼思特生物科技有限公司，HPLC纯度 ≥98%； 2 色谱条件的选择 2.1 固定相的选择 ■ 曾采用苯基柱、C8、ODS、硅胶柱、DIOL和氰基柱，苦参碱、槐定碱和槐果碱均不能达到良好的分离； ■ 考虑到用反相色谱柱时，软膏基质影响色谱柱寿命 ■ 最终参考苦参国家标准中苦参碱、氧化苦参碱的含量测定方法，选用氨基键合硅胶为固定相,本试验采用Lichrospher NH2(4.6×250mm，5μm，江苏淮阴汉邦科技有限公司)色谱柱。 2.2 流动相的选择 ■ 采用氨基柱，试验了如下几种流动相系统，见表1。最终采用苦参国家标准中苦参碱、氧化苦参碱含量测定用流动相：乙腈-无水乙醇-3%磷酸，结合本药实际情况，将比例调整为 84：9：7。 表1 流动相系统的选择 流动相组成 结果 乙腈-无水乙醇-3%磷酸(80:10:10) 苦参碱出峰太早，有干扰 乙腈-无水乙醇-3%磷酸(84:9:7) 苦参碱出峰时间合适，无干扰 乙腈-无水乙醇-0.1%磷酸(TEA调节 PH至2.5)(80:10:10) 苦参碱出峰太慢 2.3检测波长的选择 ■ 采用苦参国家标准中苦参碱、氧化苦参碱的含量测定用波长220 nm。 3 前处理方法的选择 ■ 先后采用甲醇水浴提取法，乙醇水浴提取法，氯仿放置过