无菌检验标准操作规程(SOP).doc

制药有限公司 文件名称 无菌检验标准操作规程（SOP） 页码：1/5 文件编号 版 次 第三版 制 定 审 核 批 准 制定日期 审核日期 批准日期 颁发部门 颁发数量 生效日期 分发单位 目的：制定无菌检验标准操作规程，确保检验操作正确。 范围：本标准适用于本公司大容量注射剂无菌检验操作。 责任者：质管部、化验室主任、QC检验员 内容： 1、标准依据：《中国药典》2010年版二部附录XI H。 2、简述：无菌检查方法系用于检查药品是否无菌的一种方法。检查项目包括需气菌、厌气菌及真菌检查。若供试品符合该项检查方法的有关规定，仅表明了在该检验条件下未发现微生物污染。 3、环境要求：该项检查应在环境洁净度万级（C级）背景下的局部百级（A级）的单向流区域内或隔离系统中进行。其全过程必须严格遵守无菌操作。防止微生物污染，但所采取的措施不得影响供试品中微生物的检出。操作前环境洁净度应经验证。日常检验需对试验环境进行监控。 5、方法验证：进行该项检查前应按照《无菌检查方法验证规程》确认该方法的适用性。 4、人员要求：无菌检查人员必须具备微生物专业知识，并经过无菌技术培训。 6、检验数量及检验量： 6.1、接种每种培养基所需的最少检验数量:2%或10个（取较少者），供试品无菌检查若采用薄膜过滤法，应增加1/2的最小检验数量作阳性对照用；若采用直接过滤法，应增加供试品无菌检查时每个培养基容器接种的样品量作阳性对照用。 6.2、每支供试品接入每种培养基的最少量:半量（100ml≤V≤500ml），采用薄膜过滤法时，检验量应不少于直接接种的供试品总接种量，只要供试品特性允许，应将所有容器内的全部内容物过滤。 7、细菌培养温度为30～35℃，真菌培养温度为23～28℃。 8、仪器用具：垂直层流超净工作台、生化培养箱、电热恒温水浴箱、显微镜、手提灭菌器、离心机、双碟、试管、三角瓶、刻度离心管、注射器（针头）、剪刀、镊子、注射器盒、75％酒精棉球、紫外光灯365nm、真空泵、HTY智能全封闭集菌仪、一次性使用集菌培养器。 9、消毒剂配制： 9.1、75％乙醇溶液（配制酒精棉球用）。 9.2、0.2％新洁尔灭溶液（配制消毒棉球用）。 9.3、2％来苏尔溶液（配制消毒棉球用）。 10、试剂及培养基的配制： 10.1、0.1％蛋白胨水溶液：取蛋白胨1.0g，加水1000ml,微温使溶解，滤清，调节PH值至7.1±0.2，分装，灭菌。 10.2、pH7.0灭菌氯化钠－蛋白胨缓冲液：取磷酸二氢钾3.56g、磷酸氢二钠7.23g、氯化钠4.30g、蛋白胨1.0g，加水1000ml微温溶解，滤清，分装，灭菌。 10.3、根据供试品特性，可选用其他经验证的适宜溶液作为稀释液、冲洗液。如需要，可在上述稀释液或冲洗液的灭菌前或灭菌后加入表面活性剂或中和剂。 10.4、硫乙醇酸盐流体培养基：按商品说明称取培养基，配制，摇匀，分装，按培养基说明高压灭菌，保存备用。分装的容器应适当，其装量与容器高度比例应符合培养结束后培养基氧化层（粉红色）不超过培养基深度的1/2。供试品接种前，培养基氧化层的高度不得超过培养基深度的1/5，否则须经100℃水浴加热至粉红色消失（不超过20分钟），迅速冷却只限加热一次，并应防止被污染。 10.5、改良马丁培养基：取商品干燥培养基28.5g，加水1000ml，加热溶解，分装，121℃高压灭菌15分钟（若干燥培养基结块应勿使用）。 10.6、选择性培养基： 按上述硫乙醇酸盐流体培养基或改良马丁培养基的处方及制法，在培养基灭菌或使用前加入适量的中和剂、灭活剂或表面活性剂，其用量同方法验证试验(附表1常见干扰物的中和剂或灭活方法见微生物限度检查法中）。 10.7、营养肉汤培养基：按商品说明称取培养基，配制，加热，溶解，分装，按培养基说明高压灭菌，保存备用。 10.8、营养琼脂培养基：取商品干燥培养基3.4g，加蒸馏水1000ml，加热溶解分装，121℃高压灭菌15分钟。 10.9、改良马丁琼脂培养基：取商品干燥培养基制备或按改良马丁培养基的处方及制法，加入14.0g琼脂，调节PH值使灭菌后PH值为6.4±0.2，分装，121℃高压灭菌15分钟。 10.10、制备好的培养基应保存在2～25℃，避光的环境中。培养基若保存于非密闭容器中，一般在三周内使用。若保存于密闭容器中，一般可在一年内使用。 11、试验前的准备工作 11.1、用具的洗刷 11.1.1、玻璃器皿：如试管、量筒、移液管、刻度吸管、离心管、三角瓶、双碟等用清洁液浸泡，用流水洗涤，再用蒸馏水洗涤4～5次，倒置，晾干。试管、移液管、三角瓶等使用过后，应先消毒倒出内容物后，再清洗晾干。 11.1.2、注射器用水冲洗后，用洗涤剂冲洗，然后用水冲洗干净，再用蒸馏水