不同浓度血管活肠肽对新生大鼠原始卵泡体外发育影响的实验研究.pdf

‘移!．点冬，。曼 不同浓度血管活性肠肽对新生大鼠原始卵泡体外发育影响的研究 中文摘要 不同浓度血管活性肠肽对新生大鼠原始卵泡 体外发育影响的实验研究 专 业：妇产科学 硕士研究生：李春娇 导 师：张清学主任医师 中文摘要 如何充分利用牛殖资源保存女性的生育能力，是一个值得研究的重要课题。数以 万计的原始卵泡是哺乳动物牛殖资源的储备库，而在雌性个体的一生中只有极少部分 卵泡发育成熟并排卵，绝大多数卵泡在不同的发育阶段闭锁，如果能够充分利用这部 分卵泡，将为我们提供大量宝贵的卵子资源。然而，由于我们对原始卵泡向初级卵泡 转化机制的了解甚少，迄今尚未能有效地利用卵巢内大量处于较早发育阶段的卵泡， 限制了卵泡体外培养这项技术的开腱及临床应用。有学者研究发现，神经营养因子如 血管活性肠肽(VIP)能诱导新生大鼠卵巢FSH受体、芳香化酶mRNA和蛋白质的表达， 抑制体外培养的大鼠窦前卵泡颗粒细胞的凋亡，促进卵巢类固醇激素的合成，可能在 调节非促性腺素依赖的卵泡发育与生长方面发挥着重要作用。 基于目前神经递质VIP对卵泡发育影响的研究进展，我们通过添加含不同浓度VIP 的培养基进行新生大鼠卵巢体外培养，组织学、PCNA免疫组化及TUNEL凋亡分析原始卵 泡的生长发育情况，探讨不同浓度的VIP对离体原始卵泡生长发育的影响。 材料与方法 1．动物来源： 雌性SD大鼠购自中山大学药学院实验动物中心，清洁级，出生4天，体重10一159。 ‘黟!．。巳惫，。曼 不同浓度皿管活性肠肽对新生大鼠原始卵泡体外发育影响的研究 中文摘要 2．实验方法： 组、VIPIO峭M组、VIPl0叫M组。新鲜组未经培养，直接同定、包埋、切片、染色进行病 u 0．05mg／ml抗坏血酸、青霉素50U／ml，链霉素50 ul。培养结束后做病理切片，行组织形态学检查、PCNA免疫组化和TUNEL凋亡分析。 结果 1．VIP对体外培养卵巢中早期卵泡生长发育的影响 新鲜组卵巢切片显示，0级卵泡(原始卵泡)在全部卵泡所占的比例为59．72％± 3级卵泡(转化期卵泡)3．6％±1．13％，异常卵泡6．26％_4-1．64％。 培养后，各培养组不同时期卵泡所占比例与新鲜组比较有统计学差异(尺0．05)， 培养过程中原始卵泡的百分比减少，生长卵泡和异常卵泡的百分比增加，且各培养组 的1级卵泡(早期初级卵泡)百分比明显高于新鲜组，VIPIO。M组最高，基础培养组最 低。4个不同浓度VIP组各时期卵泡所占比例与基础培养组比较有统计学差异(PO．05)， 2．PCNA免疫组织化学染色评估卵泡生长情况 3．VIP对卵泡凋亡的影响 ¨ ‘》妻。气乞。烹 不同浓度血管活性肠肽对新生人鼠原始卵泡体外发育影响的研究 中文摘要 色阳性的卵泡广泛存在于各个不同牛长时期。 VIPIO VIPIO一9M组27．54％±1．49％。总体方差显示各培养组与新鲜组比较有统计学差异 M组卵泡猾廿黢i撮低；各VIP 数与基础培养组有统计学差异(pO．05)，其中VIPlO。7 结论 1．新生大鼠完整卵巢体外培养过程中，VIP可以促进新生4天大鼠的原始卵泡向初级卵 泡的转化。 2．不同浓度的VIP均可降低卵巢组织卵泡细胞的凋亡，提高卵泡体外存活能力，VIPIO。M 较其他浓度更明显地促进卵泡细胞的增殖，降低卵泡细胞的凋亡。 关键词 血管活性肠肽、原始卵泡、体外培养、大鼠 ⅡI Effects ofdifferent concentration ofvasoactive