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Dcode 快速操作指南 1．试剂准备 按实验要求准备凝胶储备胶，缓冲液，变性凝胶溶液，过硫酸铵，上样缓冲液等。并对相应 试剂进行脱气和0.45 微米滤膜过滤，灭菌等处理。 2 ．样品准备 对PCR 产物进行琼脂糖胶定量，准备适当量的PCR 产物。对垂直变性胶，可把野生型和突 变型样品混合后上样；对水平变性胶，每块胶都需要一个野生型的对照。 3 ．系统温度控制仪的设定 A ．在电泳槽中装入适量（根据不同的胶确定缓冲液体积，见下面的分类介绍）新鲜配置的 1×TAE 缓冲液。 B ．把温度控制仪放在电泳槽顶部，接通电源线，打开电源开关，蠕动泵和加热仪。 C ．设置温度控制仪的温度，设置温度升温速率在200 ℃/hr 。 D ．预加热缓冲液至设定温度，此过程约需1-1.5 小时。也可以事先把缓冲液装在大烧杯中， 在微波炉中加热以减少预热时间。 4 ．垂直变性梯度胶灌制（DGGE ） 组装前所有玻板和垫条要保持干净和干燥。组装 时带好手套。 A ．把胶三明治放在干净的桌面上。按下图组装 好三明治结构，两端垫条上的洞置于上端。使 垫条上的凹口边缘相对放置。 B ．把三明治夹子上的螺丝逆时针旋转放松，按图 示方向夹住玻板边缘。 C ．抓紧三明治结构，把左右夹子夹到玻板边缘的 正确位置。旋紧螺丝以固定玻板。 D ．把三明治结构放置于制胶台上。放松三明治 夹子的螺丝，插入制胶卡片，使垫片水平于夹 子。 E ．把两边的夹子同时向里推，使玻板和垫片对 齐，同时用拇指把垫片推至底。旋紧螺丝，固 上海办事处：021 北京办事处：010 广州办事处：020 免费维修电话：800-820-5567 定好三明治结构。 F ．取出制胶卡片。把三明治结构从制胶台上取下，检查玻板和垫片的底部是否平齐。如果 不平齐，则要重新组装三明治结构。如果平齐，则旋紧螺丝直至有阻力感。 G ．把梳子放置于三明治垫片凹口处。制作7.5 × 10cm 垂直胶时，把中间的垫条插入三明治结 构中间使其处于梳子凹口中间。中间的垫条底 部也应与玻板底部齐平。注意：16×16cm 胶 的梳子是单孔的，不需要中间的垫条。 H ．检查梳子垫圈，确保梳子排气孔不被凝胶堵 塞。软的梳子垫圈要平整的放置于梳子垫圈架中。 I ．把三明治结构垂直的放置于桌面上。把梳子垫圈架上的螺丝旋松到头。在螺丝上中间位 置用记号笔作一箭头标记。使梳子垫圈螺丝和长玻板朝向自己，把梳子垫圈架放置于三 明治顶部，正确放置梳子垫圈架，使其与两边垫片互补。旋紧螺丝，使其刚好接触玻板， 然后再旋紧螺丝1/4 圈。 J ．在螺丝彻底旋紧前，压力夹必须附在三明治结构上。旋松压力夹螺丝，在螺丝中间位置 作标记。把压力夹放置在桌面上，使凹槽切面向上，夹子上螺丝朝上远离自己方向。 K ．翻转三明治结构，使梳子垫圈螺丝朝下，排气孔朝上。正确安装压力夹，使其在旋紧螺 丝过程中梳子垫圈架的受力均匀。旋紧压力夹螺丝直至其接触到梳子垫圈架，然后再额 外旋紧压力夹螺丝两圈。 L ．再旋紧梳子垫圈螺丝一圈。如果旋太紧，玻板可能破裂。检查梳子垫圈和垫片的密封性 之后拿掉压力夹。 M ．把注射孔接头旋进三明治夹的孔中。不要旋的太紧，否则会损坏 O 型环引起漏液。把 活塞插入注射孔中，确保其紧密性，否则会在灌胶过程中引起漏胶。 N ．把灰色的海绵放入前面的灌胶缝槽中，灌胶台上的凸轮向上。把三明治结构放置于海绵 条上，短玻板朝前。放置好三明治结构后， 把凸轮手柄放下使凸轮锁住三明治结构。 （1）7.5 ×10cm 双胶灌胶时，一次只能灌一 块胶。灌胶时需要打开三明治结构上通气孔上 的活塞，另半块胶上的三明治结构上的通气孔 上海办事处：021 北京办事处：010 广州办事处：020 免费维修电话：800-820-5567 需要堵上。 （2 ）16×16cm 胶灌注时，两个通气孔都要堵上。16×16cm 垫条是单向的，有凹槽的垫条 是位于右手边的，较小较短的垫条是位于三明治结构的左手边。 O ．用倾斜杆把三明治结构及制