Exp减数分裂..pptVIP

一、实验目的 1. 学习和掌握细胞减数分裂CS标本的制片技术和方法 2. 熟悉减数分裂的全过程及各个时期CS的动态变化和形态特征 二、实验原理 减数分裂: 特殊的真核细胞分裂 ?连续两次核分裂—MⅠ MⅡ ?前期Ⅰ变化复杂;同源CS联会、片段互换 ?后期Ⅰ同源CS分离,数目减半 以动、植物雄性生殖分裂较为方便.在适当的时机采集花蕾(花序)或精巢,经适当技术处理,可在显微镜下观察细胞的减数分裂过程 三、实验材料、器具、药品试剂 大葱(Allium fistulosum, 2n=16)幼嫩花序 显微镜,载片,盖片,镊子,解剖针,吸水纸,铅笔,酒精灯等 卡诺固定液, 45％乙酸; 0.5％醋酸洋红,95％、70％乙醇 四、实验步骤 1. 取材 制片成败的关键因素 ?大葱: 伞形花序,顶生,两性花;春季花序嫩绿饱满、总苞光滑 ?蚕豆、玉米、百合、蝗虫 2. 固定 卡诺固定液: 12-24h 95％-80％-70％梯度乙醇依次漂洗5-30min 70％乙醇保存,4℃ 3. 剥取花药 摘取2-3个小花,置吸水纸上除去保存液(可用蒸馏水冲洗后再吸干,尤其是采用醋酸洋红染色法一定要将乙醇洗净) 解剖出的花药置洁净载玻片上;镊子挤出花粉母细胞,小范围内涂成薄层 4. 染色与压片 加一滴染液(不宜多),稍后将所有可见花药壁残渣清除干净 加盖片,吸去多余染液,拇指垂直紧压,使CS散开分布于同一平面 勿使盖片发生搓动,以免破坏细胞与CS的完整性 5. 镜检 低倍下区分各时期的花粉母细胞、二/四分体以及花粉粒、药壁组织 高倍下观察,鉴别各分裂时期的CS形态结构、数目及行为变化 药壁组织: 小,着色较深 注意事项 注意区分性母细胞及小孢子形成过程中各时期细胞的特点,并与花药壁细胞进行区分: 五、作业 1. 制作能观察到较多分裂相,且各时期图象清晰的制片1-2张. 2.绘制你所观察到的减数分裂典型时期细胞、CS图象,并简要说明CS的行为特征. 3. 分析制片过程中出现的问题及可能原因. 4. 减数分裂意义何在?为什么说它是三大遗传规律的细胞学基础? * 实验七 减数分裂花粉母细胞制片及观察 百合减数分裂前期的五个时期 减数分裂模式图 中期I 后期I 末期I 前期II 四分孢子 花粉粒 制片的简要步骤 小花2-3个→冲洗→吸干→剥离花药→1d染液→挤出花粉母细胞→去除残余组织→染色5min→加盖片→吸水纸→压片→镜检 较浅 较深 染色程度 较大(差异十分显著) 较小 细胞大小差异 圆形(一个性母细胞分裂形成的子细胞保持在一起) 方形 细胞形态 减数分裂的各时期细胞 药壁细胞 左图: 水稻(2n= 24)花粉母细胞的减数分裂 1.粗线期; 2.终变期; 3.中期I; 4.后期I; 5.末期I; 6. 分裂间期; 7.前期II; 8.中期II; 9.后期II; 10.末期II; 11.四分体; 12.单核花粉; 13.单核分裂花粉; 14. 二核花粉; 15.成熟花粉粒 右图: 普通小麦(2n= 42)花粉母细胞的减数分裂 1.细线期; 2.偶线期; 3.晚粗线期; 4.晚双线期; 5.终变期; 6.中期I; 7.后期I; 8.末期I; 9.分裂间期; 10.前期II; 11.中期II; 12.后期II; 13.末期II; 14.四分体 对大多数植物来说,一般在开花的前5-10d,通常为减数分裂时期. 此时的花药呈黄绿色,绿色示早,黄色示晚, 减数分裂持续时间一般只有2-3d,取材一般在上午8:00-10:00 获得处于适当减数分裂期的材料是制片成败的关键因素,而最适的时期又因实验主要目的不同而异.取材时间并非固定不变,依植物生长发育的最适温度而定.气温过低会影响减数分裂的正常进行,此时取材细胞常处于前期、末期等时期,而终变期、后期、中期图像少; 温度过高(＞30℃)植株新陈代谢旺盛,减数分裂周期缩短,核质粘连严重,也不易获得理想的制片和观察效果.所以取材时植物的形态指标和时间必须十分恰当,才能获得理想的减数分裂图像 从保存液中取出大葱花序,摘取1-2个小花,置吸水纸上除去保存液(可用蒸馏水冲洗后再吸干,尤其是采用醋酸洋红染色法一定要将乙醇洗净) 经固定的材料可直接压片,无需解离,因为小孢子母细胞是分离的,注意勿使花药太过破碎; 将挤出的花粉母细胞(呈半透明胶状)小范围内涂成薄层; 用镊子压在花药上向一端轻轻抹去,挤出花粉母细胞,小范围内涂成薄层; 或将花药置于载片,再于其上呈十字交叉方向盖一载玻片,用拇指紧压载片将花粉母细胞挤压出,并进行涂布 加一滴染液(由于花粉母细胞在压片过程中特别容易随染液溢出,所以滴加染液宜少不宜多),稍后将所有可见花药壁残渣清除干净;如果药壁残片清除不彻底,压片过程中细胞和CS不易分散压平,片子不清洁,影响观察,而且制作永久片