冷适应过程中柑钙信号变化的研究.pdf

缩略词表 缩略符号 中文解释 Probenecid 阴离子转运抑制剂 F．127 非离子去污剂 Ca-green／AM 一种酯形式的特异钙离子荧光染料 Ftuo．3|∞讽 一种酯形式的特异钙离子荧光染料 Fluo-4／AM 一种酯形式的特异钙离子荧光染料 LSCM 激光扫描共聚焦显微镜 BSA 牛血清白蛋白 CaM 钙调素 EM 电子显微镜 [Ca?+]川 胞质游离钙离子浓度 dT／dt 温度随时间的变化 EGTA 特异性钙离子螯合剂 冷适应过程中柑橘钙信号变化的研究 摘 要 柑橘是世界上重要的经济作物，办是我国南方的一种极为重要的果树。探讨柑 橘抗逆性的生理生化机理，进而提出抗性栽培的技术措施，增强抵御自然灾害的能 力，是提高我国柑橘产量、品质和经济效益的关键，具有重大的意义。Ca2+作为第 二信使在生物体内起着重要作用。而cal十信号对植物抗寒的作用大多数只是在一年 生草本植物上得到研究．而在多年生木本植物的研究上甚少。本研究以较抗寒的柑 reticulate 橘枳壳(Poncitrus Blanco)幼叶为材 trifoliata)和抗寒性较弱的桠柑(Citrus 料．用焦锑酸钙沉淀法对钙进行组织定位：以来檬fC aurat(folia Swingle)原生质体为 材料，用LSCM观测低温下钙定位和游离钙浓度变化。 Blanco．)和枳壳(户护帕liataR锄叶片钙的亚细胞定位的实验 1．在对槿柑(Creticulate 中，25℃下生长的幼苗，显示钙定位的焦锑酸钙沉淀主要分布于液泡、细胞间隙和 细胞壁中，而在胞质和叶绿体中分布较少，叶片在开始低温锻炼(4C)培养2h内， 细胞质、叶绿体的钙水平都升高，叶绿体中钙分布在片层结构上，而液泡中的钙水 平迅速降低。但在低温锻炼时间延长到48h后，细胞内的细胞质、叶绿体的钙水平 降低。在4℃低温下锻炼7d，细胞内钙又恢复到低温处理前的水平。 2．用Fluo--4／AM染色，测定静息态及连续降温条件下来檬(C．auratifolia Swingle)原 生质体游离ca2+浓度的时空分布与动态变化。实验采用三种溶液系统：51．tmol／L的 EGTA的染色液．对照染色液。结果表明，对照染色液中温 A二3187染色液，2mmol／L 育的原生质体在LSCM下观察到，荧光位于细胞质内，在液泡中没有渗漏。A23Is7作 为ca2+载体，它可把钙从胞内钙库转移至细胞溶质中去提高了细胞溶质中游离C一+ 的浓度。EGTA是特异性Ca2+螯合剂。经EGTA反应过的细胞内仅有微弱的荧光。 所以可以说明我们的实验体系确实能够反映Ca2+的变化．还从另～侧面说明了荧光 是Fluo--4与游离ca》是特异性结合产生的。同时，其静息态下游离ca}浓度水平是 细胞对外界刺激作出回应及回应强弱的基础。连续缓慢的降温条件