农杆菌介导的拟芥液泡膜Nalt;#39;+gt;Hlt;#39;+gt;逆向转运蛋白基因（AtNHX1）转化烟草和马铃薯的研究.pdf

甘肃农业太学暑溉届藏士羊业论文 摘￥937255 摘 要 液泡膜Na+／H+逆向转运蛋白可使Na+区隔化进液泡，从而对细胞质内Na+解毒和 细胞渗透调节起作用，是盐生植物和耐盐甜土植物抵御盐胁迫所必需的。本研究利用 拟南芥液泡膜Na+压r逆向转运蛋白基因——‘4㈣首先进行模式植物——烟草的遗 传转化，以确定该蛋白的功能，然后进行目标作物一马铃薯的遗传转化，创造马铃 薯耐盐种质资源，为耐盐品种的培育奠定基础。已取得的研究结果如下： 1．烟草遗传转化体系的优化：(1)卡那霉素选择压的确定：CV87品种为转化受 体材料时，叶片分化和茎段根再生时的卡那霉素浓度应为50mg／L。T12品种作为转 化受体材料时，叶片分化时的卡那霉素筛选浓度应为100mg／L，根形成时的卡那霉素 浓度为200mg／L；(2)头孢类抗生素对烟草叶片分化的影响及对根癌农杆菌的抑菌效 果：不同浓度的6种头孢类抗生素(头孢曲松钠、头孢噻肟钠、头孢哌酮钠、头孢唑 啉钠、头孢拉定和头孢他啶)对烟草叶片分化的影响不大，分化率均在85％以上； 200mg／L头孢曲松钠和头孢噻肟钠就能对根癌农杆菌LBA4404起到较好的抑菌效果， 并可使继代3次(60d)的烟草转化植株脱菌；(3)遗传转化条件的确定：叶片无需 预培养、农杆菌OD600值0．3～O．5、侵染时间8～10miIl、共培养3d： 2．烟草转化植株的获得：(1)对经卡那霉素筛选生根的烟草进行特异引物的PCR 扩增，获得了1617bp的特异性片段，表明爿fⅣ溉，基因已导入烟草基因组中；(2) 转基因烟草植株的耐盐性表现：转基因植株耐盐性明显提高，表现在含1．0％Nacl的 MS培养基上可正常生长，在含1．5％NaCl的MS培养基上可发出根系，未转基因植 株则不能正常生长； 3．(1)马铃薯试管薯的诱导：液体培养法诱导效果最好，平均每株结薯3个。 诱导方法为：将接于MS液体培养基+3％蔗糖上的试管苗茎段，在25士1℃、2500Lx 连续光照下培养，25天后倒出培养基，加入MS液体培养基+8％蔗糖+5．00mg／L6．BA 马铃薯转化外植体及培养基的确定：试管薯薄片是较茎段转化率明显高的外植体，适 (3)马铃薯遗传转化体系的优化：1)卡那霉素选择压的确定：分化阶段和生根阶段 的卡那霉素浓度均为50m叽；2)遗传转化条件的确定：试管薯薄片无需预培养，农 杆菌OD600值0．5，侵染时间8～10min，共培养2d； 4．马铃薯转化植株的获得：(1)对经卡那霉素筛选生根的马铃薯转基因植株进行 特异引物的PCR扩增，获得了1617bp的特异性片段，表明爿f删基因已导入马铃 薯基因组中；(2)转基因马铃薯植株的耐盐性表现：转基因马铃薯植株的耐盐性明显 MS培养基上，转基因植株能正常生长，未转基因 提高，表现在含O．6％浓度的NaCl 甘肃农业太学嬲届磺士牛主论文 植株则生长受阻。 关键词：拟南芥液泡膜N删逆向转运蛋白基因(mM比w)：烟草；马铃薯：遗 传转化：根癌农杆菌；耐盐 II 甘肃农业太学2泓届硕士年业论文 Summan7 Summa巧 in could Na+to the vacuole haStlle Na+，H+antiporterla唱e separate vacuolar，it 胁ctionof cell itisalso c)哇oplasmNa+detox坶a工1dadjustiIlgo锄oregulation，a11d of aIld salt-toleraIlce．Ⅲsanicle廿a11sf0皿edNa+／H+ necessary haloph”esglycophytes