农杆菌介导的Ci和Glu基因转化黄瓜的研究.pdf

摘 要 栽培面积较大。真菌病害的发生给黄瓜生产带来巨大的损失，制约了黄瓜的产量和 品质的提高。 植物基因工程的快速发展为抗性育种提供了一条崭新而有效的方法。来源于菜 豆的几丁质酶基因(chitinase gene，Chi)，其蛋白质产物能够降解含几丁质的真菌细 胞壁，抑制真菌生长。克隆自烟草的p-1，3-葡聚糖酶基因(p-I，3-glucanasegene，Glu) 产物B．1，3．葡聚糖酶能够降解许多真菌菌丝暴露在表面的p．1，3，葡聚糖，从而抑制真 菌的生长。 本实验建立了稳定的黄瓜再生、转化体系，并将Chi基因和Gtu基因导入3个 基因型的黄瓜基因组中。主要结果如下： BA 1．对于黄瓜离体再生芽的诱导，黄瓜萌发状态的幼嫩子叶在MS附加2．0mg／L 和1．0 mg／LABA的激素组合中再生最好。 2．新型激素TDZ对黄瓜离体外植体的不定芽诱导作用不明显，表现出较强的生长 素活性，黄瓜子叶和下胚轴在MS附加有低浓度TDZ的培养基中迅速生根。 mg／LAgN03能发挥 3．适量浓度的AgN03可以促进黄瓜离体子叶的再生，通常2．0 最好的效果，过量则抑制芽的再生。 BA和】，0 ABA，并添加有2．0AgN03时， 4．在MS附加激素2．0 mg／L mg／L lqqIg／L 津研四号和津研七号幼嫩子叶的不定芽诱导率分别为92．97％，82．43％，另一基 因型绿霸春的幼嫩子叶芽的再生率为94。73％。 5．非转化子叶Km抗性测验表明：100mg／L的卡那霉素完全抑制津研四号和津研 七号的子叶再生，在此浓度下绿霸春产生极少的白化芽和畸形芽。 6．头孢霉索浓度在100～400 mg／L范围内对黄瓜子叶外植体不定芽诱导的抑制作 用不明显。 7．烟草细胞悬浮系看护培养对黄瓜的遗传转化影响不明显。 PCR、Southern杂交检测证明，外源基 8．对部分抗性植株提取DNA，经Multiplex 因已整合入黄瓜基因组中。获得津研四号和津研七号转基因再生植株。 9．转基因植株网间接种试验表明，部分转基因黄瓜对霜霉病的抗性增强。 关超词：黄瓜；Chi基因；Glu基因；遗传转化：抗病性 Transformationof Agrobacterium—mediated Cucumber With Chitinase and Genes 3-1，3-glucanase Abstract Crop islimited andother production bypathogenic fungi diseases．Agronomic suchas of weremainmethodstosolve practices applicationpesticides the problem，and some lead can tO