菠萝凋萎相关病毒实时荧光定量RT-PCR检测方法的建立.docVIP

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2016-01-18 发布于贵州
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菠萝凋萎相关病毒实时荧光定量RT-PCR检测方法的建立.doc

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菠萝凋萎相关病毒实时荧光定量RT-PCR检测方法的建立

园艺学报 2014，41（6）：1257–1266 http: // www. ahs. ac. cn Acta Horticulturae Sinica E-mail: yuanyixuebao@126.com 收稿日期：2014–01–27；修回日期：2014–03–27 基金项目：公益性行业（农业）科研专项经费项目（201203021）；海南省重大科技项目（ZDZX2013020-3）；海南省科学事业费项目（琼财预[2013]131号）；海南省重点科技计划应用研究及产业化项目（ZDX * 通信作者 Author for correspondence（E-mail：hefanhn@163.com）菠萝凋萎相关病毒–2实时荧光定量RT-PCR检测方法的建立胡加谊1,2，罗志文2，范鸿雁2，李向宏2，刘志昕3，何凡2,* （1海南大学环境与植物保护学院，海口 570228；2海南省农业科学院热带果树研究所，农业部海口热带果树科学观测实验站，海口 571100；3中国热带农业科学院热带生物技术研究所，海口 571101）摘要：菠萝凋萎相关病毒（Pineapple mealybug wilt associated virus-2，PMWaV-2）是引起的菠萝凋萎病（Mealybug wilt of pineapple，MWP）的重要病原。本研究中根据PMWaV-2外壳蛋白基因序列设计特异性引物和探针，建立基于TaqMan探针的实时荧光定量RT-PCR检测方法。该方法能高灵敏检测出阳性样品，对阴性样品及空白对照均无荧光反应；灵敏度比普通PCR高100倍；重复性试验表明批内和批间变异系数均在1.85%以内，表明本方法是一种操作简便、特异性强、灵敏度高、重复性较好的PMWaV-2 定量检测方法。关键词：菠萝；菠萝凋萎病毒–2（PMWaV-2）；TaqMan探针；实时荧光定量RT-PCR；检测中图分类号：S 668.3；S 432 文献标志码：A 文章编号：0513-353X（2014）06-1257-10 Development of a Real-time Fluorescent Quantitative RT-PCR Method for the Detection of Pineapple mealybug wilt associated virus-2 HU Jia-yi1,2，LUO Zhi-wen2，FAN Hong-yan2，LI Xiang-hong2，LIU Zhi-xin3，and HE Fan2,* （1 College of Environment and Plant Protection，Hainan University，Haikou 570228，China；2 Institute of Tropical Fruit Trees，Hainan Academy of Agricultural Sciences/Haikou Investigation Station of Tropical Fruit Trees，Ministry of Agriculture，Haikou 571100，China；3Institute of Tropical Bioscience and Biotechnology，Chinese Academy of Tropical Agricultural Sciences，Haikou 571101，China） Abstract：Pineapple mealybug wilt associated virus-2（PMWaV-2）is an important pathogen that causes Mealybug wilt of pineapple（MWP）. This study established a real-time quantitative RT-PCR method with TaqMan probe based on specific primers of conserved nucleotide sequence of PMWaV-2 coat protein gene. The results showed that the method is highly sensitive to positive sample，but has no