感染性疾病免疫学检测.ppt

 HBsAg抗原表位 1、共同决定簇： a（aa124-147）； 2、型特异决定簇： （1） d/y（ aa122，赖氨酸/精氨酸）； （2） w/r（ aa160，赖氨酸/精氨酸）； 四种亚型：adr、adw、ayr、ayw。 检测中常见的问题 1、一步法测定中的钩状效应（Hook effect）： 双抗体夹心一步法的钩状效应 钩状效应是HBsAg一步法检测时不可避免的现象； 由于钩状效应的存在，一步法检测HBsAg所得到的检测信号无法确定其真实性； 解决钩状效应的根本方法为固相抗体与抗原反应后分离游离抗原，再加标记抗体的两步法检测： 　第一步：包被抗体捕获抗原成为固相，然后分离游离抗原；第二步：固相抗原与标记抗体结合，分离液相标记抗体后记录检测信号。 　两步法检测能消除钩状效应： 2、人抗鼠抗体效应 (Human anti-mouse effect, HAMA效应) 对检测的干扰 HAMA效应的假阳性模式：标本中的人抗鼠抗体分别与固相HBsAb和标记HBsAb McAb结合，形成固相HBsAb－HAMA－HBsAb复合物。 3、S基因突变引起的HBsAg漏检： 基因突变引起“a”决定簇内部一个或多个氨基酸置换、缺失或插入，HBsAg 蛋白质氨基酸组成发生改变，导致其抗原性产生变化。 变异率高 ，自然变异和免疫逃避，变异无地域性。 HBsAg抗原性发生改变，不能被野生型HBsAb所识别。 不一定HBsAg抗原性发生改变后就一定漏检。很多时候野生型与突变型是混合存在的，这种情况虽然有突变，同样可以检出 。 　 5、标本自身及前处理引起的干扰因素 6、操作不当或人为等外在因素 ELISA 检测模式：一步法。原材料：McAb； 检测结果：定性。 缺点：钩状效应，灵敏度较差，HAMA干扰、RF干扰，不能定量。 化学发光（某些公司） 检测模式：一步法。原材料：McAb； 检测结果：定量。 灵敏度好于ELISA，无RF干扰。 缺点：钩状效应， HAMA干扰，定量结果不能溯源到国际标准。 Abbott公司 检测模式：两步法。 原材料：McAb(固相），PcAb（ Fab，标记抗体） ； 检测结果：定量。 优点： 1）无钩状效应； 2）无HAMA、无RF干扰； 3）灵敏度高； 4）加用了针对不同突变株病毒抗原的检测抗体，可以进行HBsAg突变株的检测； 5）定量结果可溯源到国际标准。 时间分辨荧光 检测模式：两步法。 原材料：McAb(固相），PcAb（ 标记抗体） ； 检测结果：定量。 特点：无钩状效应；灵敏度高；无HAMA干扰。不能进行HBsAg突变株的检测, 可能有RF干扰，定量结果不能溯源到国际标准。 目前国际上常用的HBsAg标准物质： 德国兰根埃尔利希研究所（Paul Ehrlich Institute） 参考物: PEI/ml; 法国参考物： ng/ml; 雅培参考物： ng/ml（Axsym), IU/ml (i2000)； NIBSC参考物（WHO)：IU/ml. （英国国家生物标准与检定所，National Institute for Biological Standards and Control, NIBSC) 1 IU/ml=0.58 PEI/ml=1.93 “法国”ng/ml=5.59 雅培ng/ml 原材料：HBsAg 　　1、天然HBsAg ：血源的纯HBsAg，即S蛋白（小球形颗粒）； 2、基因工程重组抗原（rHBsAg) HBsAg阳性+HBsAb阳性模式讨论 在HBV感染及机体免疫过程中，可能有HBsAg和HBsAb同时存在的短暂过程，但很难出现在检测过程中： HBsAg过剩时，HBsAb与其结合，以抗原抗体复合物形势存在，血中测不到游离抗体。 HBsAb过剩时，HBsAg以抗原抗体复合物形势存在，血中测不到游离抗原。 由于抗原抗体反应是可逆的，在检测灵敏度大幅提高的情况下，上述情况不能绝对化。 HBsAg阳性+HBsAb阳性模式讨论 部分HBV的S基因突变引起“a”决定簇氨基酸组成发生改变，导致其抗原性产生变化，野生株抗HBs不能将其清除。 不同亚型HBV感染 。 两株不同亚型HBV感染及机体免疫过程： 1、两株不同亚型HBV同时或先后感染同一个体，合成两种不同亚型的HBsAg1和HBsAg2； 2、前者刺激机体产生HBsAb1，后者未刺激机体产生HBsAb2； 3、HBsAb1中和了相应的HBsAg1而不能中和HBsAg2, HBsAg2与HBsAb1同时存在。 常见HBsAb检测情况： ELISA 原材料：天然抗原。 检测模式：一步法。 检测