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摘要
摘要
目的：
通过建立乳鼠心肌细胞冷应激模型观察不同时间和温度下缝隙连接蛋白43
表达的变化，并在抗心律失常肽(从P10)作用下观察其对心肌细胞间传导的
影响，从而探讨心肌细胞损伤和保护的病理生理机制。
方法：
取刚初生1．3天的乳鼠56只，随机分为正常组、试验1组：4℃1h、3h和6h，试验
细胞原代培养，选培养至5d的心肌细胞，分别将其置入上述温度环境中，并分
别予以各时间段干预，然后置于37℃水浴箱中复温，置孵育箱内继续培养6h，建
后以流式细胞仪检测各组细胞凋亡率，聚合酶链反应(PCR)检测目的基因缝隙
blot)检
连接蛋白43(mIⅢACx43)的表达变化，以及蛋白免疫印迹法(Wrestem
测目的蛋白Cx43和P．Cx43的表达，并进行统计学分析。
结果：
1、心肌细胞原代培养：心肌细胞种板2．4h后，在倒置显微镜下观察到心肌
细胞最初开始呈贴壁生长，细胞形态为圆形，后为梭形。第1d显微镜观察可视
心肌细胞伸出较短的伪足，偶可见有单个较弱搏动的心肌细胞，频率慢，约20
次／分，律齐：第2d细胞有部分伪足已开始融合，搏动频率较前有所加强，但也
较缓，第4d心肌细胞搏动频率明显，约为75次／分，律齐，并且可观察到细胞间
己开始逐渐相互融合，呈片状群体性搏动，有规律。第5．6天乳鼠心肌细胞生长
旺盛，活跃，每搏频率可达85次／分以上，律规整。心肌细胞在冷应激干预后可
视细胞逐渐分散，核裂解，搏动范围缩小及频率亦明显缓慢。
2、流式细胞仪示4℃和0℃组随着冷刺激程度的加强和时间的延长细胞凋亡
组(1．05土O．02)％相比，有统计学差异(PO．05)．
1．33土0．02、
43 (Cx43)mIⅢA的表达低于正常组(1．68士0．01、
II
摘要
和 0℃各组Cx43mRNA (2．20士O．02vsl．68士O．03、
的表达分别为
1．66士0．01vsl．33土0．02、1．42士O．01vsl．01士O．01)和 (1．20土O．02vs0．86士0．01、
(P0．05)．与刺激组相比较统计学有差异。
blot)
4、冷应激模型建立后，提取各组细胞蛋白，通过免疫印迹法(Westem
(P0．05)；4℃lh．3h和6hP．Cx43蛋白的表达分别为(0．82士O．01、0．73士0．02、
0．58士0．01
和6h
和对照组相比较，有统计学意义(P0．05)；同时与相应各冷刺激组(0．60土0．01、
0．5
1士0．01、0．30土0．01)比较差异亦呈统计学差异(PO．05)。
结论：
1、急性冷应激条件下，心肌细胞易受损，心肌细胞的凋亡率呈逐渐增加趋
势。
2、急性冷应激致心肌损伤中，心肌细胞偶联物质一缝隙连接蛋白43(Cx43)
摘要
mI矾A和蛋白水平及磷酸化缝隙连接蛋白43(P．Cx43)的表达有着不同程度的下
调，受刺激强度和时间长短的影响明显。
3、抗心律失常肽(AAPl0)具有通过提高细胞间偶联物质一缝隙连接蛋白
43(Cx43)和磷酸化缝隙连接蛋白(P．Cx43)来改善细胞间传导的功能。
关键词：心肌细胞；冷应激；缝隙连接蛋白；抗心律失常肽
IV
ABSTRACT
Ubjective：
the
Through modelof
c01dstresson
establishing
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