Arapidquantitativemethodforpolysaccharidesingreentea(译文).docVIP

从绿茶和乌龙茶中提取的茶多糖的含量的一种快速测定方法 摘要 从五种不同的茶叶中获得的茶多糖（TPS）均包含有相似的糖类和氨基酸组成. 茶多糖内多糖主要由阿拉伯糖，半乳糖和葡萄糖以大约1：1：0.5的摩尔比组成. 茶多糖内蛋白质由以缬氨酸，丙氨酸，甘氨酸，谷氨酸为主的常见的16种氨基酸组成. 基于这个结果, 纯化的茶多糖可作为通过绘制相关系数为0.9961的吸光度与茶多糖质量的校正曲线的苯酚硫酸反应的校准标准. 通过本文方法， 茶多糖的质量回收率界于84.88%到95.7%，相对标准偏差为5.53%。可见这种方法简单，快速，可靠，是适用于从绿茶和乌龙茶中提取的茶多糖的定量分析的理想方法。 关键词 茶多糖;糖分析;标准曲线;苯酚硫酸法 缩略语 TPS 茶多糖;HPGPC 高性能凝胶渗透色谱 介绍 茶，一种世界性的饮料，已被安全地食用了数百年，含有多种生物活性物质，如茶多酚，茶多糖（TPS），茶色素，茶氨酸，咖啡因，维生素和矿物元素[1–6]. 近年来, 茶多糖, 一种糖蛋白, 已引起公众的关注. 据目前报道茶多糖具有诸如降血糖、降血脂、抗氧化活性和刺激免疫系统等多种功能 [7–10]. 因此，茶多糖的定量测定，像其他生物活性多糖一样，成为一个来控制功能性食品产品质量的关键程序[11]. 分光光度计比色法和高性能凝胶渗透色谱法（HPGPC）[12]. 但是，这些方法有很多的局限性.葡萄糖或其他单糖通常被用作传统的分光光度比色法的校准标准，但是由于茶多糖是不同的单糖，糖醛酸和蛋白质组成的一种糖蛋白，这样就会导致结果与真值之间有很大的偏差[8–10]. HPGPC 通常用于确定多糖的纯度也曾被报道用于检测茶多糖. 但是HPGPC方法中, 杂质，比如和茶多糖有相同分子量的蛋白质，因其产生与茶多糖相同的峰值通常会被误认为是茶多糖.因此，HPGPC法只适用于有较高纯度或在检测前用较长时间排除掉干扰化合物的茶多糖. 因此，选择一个校准标准是快速定量测定茶多糖和其他糖蛋白含量方法中的关键. 相关研究至今未见报道. 有三种茶叶，绿茶，乌龙茶，红茶. 他们之间的区别主要在于他们的工艺条件，绿茶不经发酵工段，乌龙茶需经半发酵工段而红茶需要进行完整的发酵. 前两者, 占据中国茶市场的很大份额, 含有更多的茶多糖并经常用于浸提茶多糖[13]. 目前为止，并无报告在相同条件下从绿茶和乌龙茶中提取的茶多糖的组成和分子量分布差异之间的不同. 如果相同条件浸提出的茶多糖包含相似的组成,那么在可以得到精确的茶多糖含量的基础之上可以用得到的茶多糖作为绘制标准曲线的校准标准. 本文的目的就在于研究出一种快速、可靠的用于测定绿茶和乌龙茶中茶多糖的方法. 材料和方法 材料 Q型琼脂凝胶柱和G100型葡聚糖凝胶柱购自Amersham Pharmacia生物科技有限公司（中国）.TSK G3000PW柱购于Tosoh公司（日本）.苯酚和硫酸购于上海化学有限公司（中国，上海）. 标准多糖购于Amersham Pharmacia生物科技有限公司（中国）. 从不同种类茶样中制备茶多糖 将茶叶粉碎，绿茶粉浸泡在80%乙醇以除去大部分的色素然后在45°C的烤箱中烘干。 脱色茶叶粉末混合均匀浸于水中，浸提温度75℃，物料比1：201小时，过滤浸出液，滤液以转速4000r/min离心10分钟。上清液减压旋转蒸发至原体积的1/10之后用95%乙醇以1:4（V:V）（25mmol/l）0.8ml/min的速度过Q琼脂糖凝胶快速流柱（20mm×60cm）（50mmol/l）12ml/h的速度在葡聚糖G100柱（16mm×60cm）上收集并进一步纯化多糖组分.收集多糖洗脱液，冷冻干燥， 纯化后的产品使用配备了RID-6A映射指数探测器(RID)并采用TSK G3000PW柱（7.8mm×30.0cm）（Agilent，American）30℃，红外测定范围设定为32 AFUS. 茶多糖在5ml/min的水中的洗脱峰为单峰。标准葡聚糖T-10，T-40.T-70，T-110（Pharmacia）Endwin等人的方法 [14]：6890型气象色谱，DB225毛细管柱（30m×0.32mm×25μm）1ml/min; FID检测器; 柱温220℃. 茶多糖(25 mg) 溶解于6mol/L盐酸溶液中在110℃下于vacuated管中水解20小时. 使用日立835-50型氨基酸自动分析仪测定水解产物. 茶多糖中糖醛酸含量的测定使用Blumenkrantz的方法[15]. 蛋白质浓度测定采用Bradford的方法[16]. 比色法 纯化的茶多糖用作用苯酚硫酸法绘制标准曲线的校准标准[17]. 茶多糖中多糖含量的测定也采用苯酚硫酸法. 比色法试验样品的预处理 为避免掩盖读数的可靠性, 因为试样中可能