慢性胰腺炎和胰岛β细胞K-%2cATP-通道相关性的研究.pdf

天津医科大学 博士学位研究生论文 第二部分 慢性胰腺炎胰岛13细胞KATP通道的表达及药物的干预作用 摘 要 目的：观察慢性胰腺炎大鼠胰岛13细胞K^av通道表达的改变，探讨西药那 格列奈和中药丹参素对胰岛13细胞KArP通道表达的干预作用，及药物对CP大鼠 糖耐量、空腹血糖、胰导素水平等异常改变的治疗作用和作用机制。方法：选取 健康Wistar大鼠，参照第一部分方法建立慢性胰腺炎大鼠模型和对照，成模后将 大鼠分为模型组、那格列奈组、丹参素组和对照组，每组lO只，那格列奈组大 鼠每日每只予那格列奈溶液(37。5mg／kg体重)灌胃，丹参素组大鼠每日每只予 丹参素溶液(O．224mg／kg体重)灌胃，模型组与对照组大鼠均每日以蒸馏水 (FBG)和血胰岛素的变化，处死动物留取胰腺组织及血标本，观察各组大鼠胰 腺形态、病理改变，激光共聚焦显微镜观察免疫荧光染色的胰岛13细胞KATP通 道亚基Kir6．2和SURl的表达改变，Westernblot法检测K拍．2和SURI蛋白表 两种药物的干预作用。结果：模型组大鼠与对照组相比，表现为糖耐量异常， FBG明显升高(∥O．05)，血胰岛素含量明显降低(pO．05)；那格列奈和丹参素 可以有效的改善这些异常(po．05)，那格列奈治疗效果更为明显。胰腺病理显 示：模型组胰腺导管和腺泡结构明显破坏，部分区域明显坏死，血管扩张充血； 炎细胞浸润明显，以淋巴细胞为主，炎细胞周围可见空晕；胰岛结构破坏，O、 B细胞不同程度的减少．部分组织可见纤维组织增生。那格列奈治疗组可见破坏 的胰岛结构部分修复，a、p细胞数量比模型组增多，丹参素治疗组则可见到炎 blot显示模型组Kir6．2 细胞浸润数量明显减少，胰腺纤维化表现减轻。Western 和SURl蛋白表达显著低于对照组(po．05)，那格列奈对于二者的表达表现了 U 天津医科大学 博士学位研究生论文 一定的上调作用，丹参素对于B细胞KAw通道的表达几乎没有影响，这与免疫 荧光观察到的结果基本一致。RT一(巢式)--PCR检测Kit6．2和SURImRNA 结果显示，模型组二者mRNA表达明显低于对照组(po．05)，那格列奈对二 者mRNA表达较模型组有上调作用，但仍显著低于对照组，丹参素对两种亚基 mRNA表达的改善几乎没有作用。结论：油酸诱导的慢性胰腺炎大鼠表现出糖耐 量异常、空腹血糖和血清胰岛素含量异常，外分泌腺体广泛退化，内分泌腺体损 伤，慢性炎症浸润及组织纤维化，胰岛B细胞KAxP通道蛋白及mRNA表达降低， 那格列奈和丹参素能从不同程度、不同角度对这些异常有所改善。中西医结合治 疗将具有较好的疗效和应用前景。 suRI那格列奈丹参素 关键词慢硅雾陋炎p细胞K—TP通道鼬r6·2 IⅡ 天津医科大学 博士学位研究生论文 第三部分 大鼠胰岛细胞的分离、纯化和原代培养的方法研究 摘 要 目的：研究正常Wistar大鼠胰岛细胞分离、纯化和原代培养的最优方法和条 件，提供胞膜完整、活性佳的胰岛细胞，为进一步探讨慢性胰腺炎大鼠胰岛细胞 电生理改变及药物的于预作用提供必要的前提和基础。方法：水合氯醛腹腔麻醉， 采用胶原酶v逆行灌注，原位消化及Ficoll-400梯度离心的方法分离、纯化大鼠 胰岛，并分离、培养胰岛单细胞。结果：1．采用胶原酶逆行灌注、Ficoll-400梯 度离心法分离、纯化胰岛，每只大鼠可得到321+60个胰岛。2．急性分离、培 养的胰岛细胞12h．24h贴壁，4．5d胰岛细胞生长状态最佳，胞膜完整，折光性好。 结论：经胰胆管逆行灌注胶原酶v、原位消化及Fic