ADV分离株全基因序列测定及VP2抗原表位区的表达和应用.pdf

捅璺 VP2b，经PCR扩增、酶切和测序分析确证其正确插入到表达载体中，阅读框萨确，成 功地构建了原核表达载体。阳性重组质粒转化宿主菌TBl，用IPTG进行诱导表达，对 表达产物进行SDS．PAGE检测和免疫印迹分析。结果表明两段融合蛋白均以包涵体形式 获得了有效表达，表达产物分别占总菌体蛋白的32．7％和37．41％：表达产物的分子质量 下，4h时其表达量达到高峰：Westernblot分析表明表达蛋白能被兔抗MBP抗体所识 别。将分离和初步纯化的表达包涵体蛋白作为抗原，对阳性血清进行CIEP检测，验证 其免疫活性，并与标准抗原的CIEP检测结果相比较，二者的符合率达到94．3％。以本 实验获得的重组蛋白作为诊断抗原的特异性、重复性、敏感性均较好，初步建立了临床 诊断方法。 总之，本研究对ADV国内分离毒株进行分离鉴定和全序列测定，为研究国内ADV病 毒株的进化特点和规律提供基础性资料；在国内首次利用原核表达载体成功地对VP2主 要抗原表位区进行表达，并以其为抗原，初步建立了ADV抗体的CIEP检测方法，将为 国内养貂场有效开展阿留申病血清学调查提供有效的技术手段，在貂群的净化中发挥巨 大的作用。 关键词水貂阿留申病毒，全序列测定，遗传变异分析，VP2基因，原核表达 Abstract AIeutian causedAleutianminkdiseasevirus to Disease(AD)，whichby belonged Parvovirinac a cllfoulcinfectiousdisease wouldoanse Amdovirus，ismajor ofmink．AD itWas inthe immunologicsystem wide allovertheworld mink patho—disharmony．Andspread withbotllverticalandhorizontal disease transmission．Thecausedacuteinterstitial pneumonia eveudeathofthenewbirth minkwithout andthedescentof young antibody andhealthstatusoftheadultminks．ADresultedinincreaseofdeathmte capacity,furquality andellolmolL$economiclossofminkcultivation．Forthe few past years，thepopular was in mink onethe information Chinese levelADinfectionis of reported cultivation．High effectfactorsfor mink Chinesecultivation all-important developing detectionandcondemninfectedminkstocleanthe Wasused