《薄层层析》.pdfVIP

六、薄層層析 29 六、薄層層析 鋁箔紙 薄層層析片 試樣點 • • • 展開劑 圖6-1 薄層層析片展開 一、原理： 層析法（chromatography ）是利用化合物在靜相與流動相之間的分配差異 以分離混合物的方法。層析法依據靜相與流動相之不同，分為管柱層析 （column chromatography ）、薄層層析（thin layer chromatography ，TLC ）、 氣液層析（gas liquid chromatography ，GC ）等。薄層層析是吸附性色層 分析的一種，將吸附劑如矽膠或礬土均勻塗佈在鋁片、膠片或玻璃板上形成 薄層，作為層析靜相（stationary phase ），再將混合物試樣點附在此薄層靜 相上，以液體展開劑作為流動相（mobile phase ），透過毛細作用由下往上 移動。由於不同的化合物與靜相之吸附力，和流動相間溶解度的差異，當展 開劑上升、流經所吸附的試樣點時，吸附力弱的物質移動快，吸附力強的移 動慢。由於各種物質移動的速率不同，使混合物最後在靜相薄層上分開，達 到分離目的。一個化合物在層析片上上升的高度與展開劑上升高度的比值， 是化合物在該分析條件下的特性參數，稱為R 值。利用R 值，可以判斷兩 f f 化合物是否為相同的化合物。除了可用來判斷兩化合物是否為相同，或是不 同，也可用於決定混合物中至少含有多少種成分物、作為管柱層析沖提劑選 擇的參考，或用來檢視分離純化方法的離析成效，還可以追蹤化學反應的進 行程度。 30 有機化學基礎實驗技能 二、器材： 實驗器材包含：薄層層析片、鑷子、毛細管、展開槽、展開劑、試樣溶液、 紫外光燈。 （一）薄層層析片 薄層層析片一般以矽膠（silica gel ）、鋁礬土（alumina ）或其它物質作 為靜相吸附劑，此靜相吸附劑與膠結劑，例如常用的硫酸鈣，在水中混 合成稀泥狀後，均勻的塗佈在乾淨的玻璃片、鋁片或膠片上，待乾燥後 就形成了靜相的薄層。目前市面上有多種薄層層析片販售，本實驗所使 用的層析片，是在所塗佈的矽膠靜相吸附劑中添加螢光劑，在波長254 nm 的紫外光照射下，整個薄層片會發出綠色螢光，在有會吸收紫外光 的試樣點的位置，則呈現暗點，因此可以很容易地快速檢測分離的結果。 （二）毛細管 待分離的試樣溶液須使用內徑小於 1 mm 的毛細管點在層析片上，因此 在正式實驗之前，首先需製作毛細管。使用測定熔點的毛細管，置於酒 精燈火焰的外焰溫度較高處加熱，並同時均勻旋轉至毛細管軟化，然後 離開火源，迅速往水平方向輕拉，就可以拉出細長的毛細管。使用磨砂 紙輕劃毛細管，從中折斷，得到兩支細的毛細管。薄層層析所用的毛細 管亦可直接購得。 （三）展開劑 薄層層析常用具揮發性的溶劑作為展開劑，例如低極性的正己烷 （hexane ），或是高極性的乙酸乙酯（ethyl acetate ）。高極性溶劑與矽 膠靜相的親和力較高，較易取代吸附於靜相上的化合物而帶動化合物上 升。適當的挑選展開劑的極性，可以調整化合物在層析片上爬升的位