食品微生物A实验指导.docVIP

实验一 实验目的了解方法实验原理镜口角·sinθ）。香柏油（折射率为1.5，空气为1.0）作介质，其NA可接近1.5，其分辨率可达到0.22um，大部分细菌直径在0.5um以上，因此用油镜可以更清楚的观察细菌的个体形态。 三、仪器、材料与试剂 实验步骤4、油镜观察：高倍镜下找到观察区域后，将镜筒抬高，将油镜转至正下方。在标本的镜检区域滴一滴香柏油。从侧面注视，（用粗调节器）将镜筒小心地降下，使油镜浸在香柏油中。（其镜头几乎与标本相接，应特别注意不能压在标本上，更不可用力过猛，否则不仅压碎玻片，也会损坏镜头）（从目镜内观察）进一步调节光线，使光线明亮，再用粗调节器将镜筒徐徐上升，直至视野出现物像为止，然后用细调节器校正焦距，使出现的物象清晰、观察。（如油镜已离开油面而仍未见物像，必须再从侧面观察，将油镜降下，重复操作至物像看清为止。） 5、还原与保养 下降载物台，将油镜头转出，先用擦镜纸擦去镜头上的油，再用擦镜纸蘸少许二甲苯擦去镜头上残留油迹，再擦去残留的二甲苯，（注意向一个方向擦拭）。将各部分还原，转动物镜，使物镜头不与载物台通光孔相对，而是成八字形位置，再将载物台下降至最低，洁载物台等机械部分，套上镜套，放回原处。 五、注意事项 1、拿显微镜时，一定要右手拿镜臂，左手托镜座，不可单手拿，更不可倾斜拿，镜座距实验台边缘不低于10cm。 2、镜面只能用擦镜纸擦，不能用手指或粗布，以保证光洁度，有盖玻片的可直接用擦镜纸擦拭，无盖玻片的要小心的用擦镜纸拖拭香柏油和二甲苯，防止将标本擦掉。 3、观察标本时，必须依次用低、高倍镜，最后用油镜。 六、作业：绘出观察到的细菌形态图。 实验二 实验目的1、革兰氏染色的原理掌握革兰氏染色的方法。 实验原理革兰氏染色。它是1884年由丹麦医师Gram创立的可将所有细菌区分为两大类：染色反应呈紫色的称为革兰氏阳性细菌，用G+表示；染色反应呈红色的称为革兰氏阴性细菌，用G-表示。细菌对于革兰氏染色的不同反应，是由于它们细胞壁的成分和结构不同而造成的。革兰氏阳性细菌的细胞壁主要是由肽聚糖形成的网状结构组成的，在染色过程中，当用乙醇处理时，由于脱水而引起网状结构中的孔径变小，通透性降低，使结晶紫-碘复合物被保留在细胞内而不易脱色，因此，呈现蓝紫色；革兰氏阴性细菌的细胞壁中肽聚糖含量低，而脂类物质含量高，当用乙醇处理时，脂类物质溶解，细胞壁的通透性增加，使结晶紫-碘复合物易被乙醇抽出而脱色，然后又被染上了复染液（番红）的颜色，因此呈现红色。材料与试剂 四、实验步骤1、：将标本片迅速通过火焰三次，予以固定。（1）初染加结晶紫一滴，分钟，。 （2）媒染滴加碘液一分钟，水洗。 （3）脱色 95％酒精20~30秒钟，立即用水冲净酒精。（4）复染番红染12分钟，水洗。（5）镜检干燥后，置油镜观察。呈红色，菌呈紫色。以分散开的细菌的革兰氏染色反应为准，过于密集的细菌，常常呈假阳性。实验三 培养基的制备与灭菌 实验目的1、掌握细菌、真菌培养基的配制、分装方法。 2、掌握各种实验室灭菌的方法及技术。 实验原理（培养基是人工配制的，适合微生物生长繁殖或产生代谢产物的营养物质。由于微生物具有不同的营养类型，对营养物质的要求也不尽相同，加之实验研究的目的不同，培养基的种类很多，使用的原料也各有差异。培养基中含有微生物所必需的碳源、氮源、能源、无机盐、生长因子和水分，其配制原则为：1、选择适宜的营养物质；2、营养物质的浓度及配比合适；3、控制pH值；4、控制氧化还原电位；5、灭菌处理。） 细菌和真菌培养适宜的pH分别约为7.2和4.5~6.0。培养基按物理状态的不同分为固体培养基和液体培养基。固体培养基需要加入1.5~2.0%的琼脂作为凝固剂，液体培养基中不加任何凝固剂。任何一种培养基配制完成后要彻底灭菌，实验室常用的灭菌方法为高压蒸汽灭菌。 仪器、材料与试剂牛肉膏、蛋白胨、NaCl、NaOH、HCl、琼脂；土豆、黄豆芽、葡萄糖或者蔗糖。 搪瓷缸、天平、试管、移液管、吸耳球、切板、刀、玻璃棒、量筒、纱布等。 实验步骤1、细菌培养基的制备： （1）药品称量：称取牛肉膏0.5g，蛋白胨1g，NaCl 0.5g加入搪瓷缸内。 （2）定容：在搪瓷缸内加入少量水，在石棉网上加热，期间不断搅拌，待药品全部溶解后，冷却，至量筒中定容至100ml。 （3）调节pH，分装：用NaOH溶液调节pH值至7.2~7.4，将调好pH的培养液分装入两支试管内，每支不超过高度的1/4，约5ml左右。 （4）固体培养基的制备：称取琼脂1.8克，加入搪瓷缸内的培养液内，加热溶解，分装于3支试管内，每支不超过试管高度的1/5。 （5）包扎和标记：分装后的试管用牛皮纸或报纸等包扎，标注好培养基名称、组别、姓名、日期等。 2、马铃薯葡萄糖琼脂培养基（PDA培养基）： （