利用蚕豆根细胞微核技术检测洗涤剂的毒性.doc

学生设计性实验论文 题目：利用蚕豆根尖细胞微核技术检测 洗衣粉的毒性 姓名 学 专业 生物技术 班级 123 班 相关实验课程名称 细胞生物学实验 指导教师及职称 实验学期 2013-2014 学年 二 学期 太原师范学院教务处编印 利用蚕豆根尖细胞微核技术检测洗衣粉的毒性 摘要：蚕豆根尖细胞微核试验（Micronucleustest，MC-NT）技术是一种以染色体断裂及纺锤丝损伤为测试终点的微核检测方法。本次实验以蚕豆根尖细胞为材料，研究洗衣粉的诱变效应。结果表明： 关键词 蚕豆根尖细胞 微核 洗衣粉 引言：微核是间期细胞中在细胞核之外存在的一个或多个圆形或杏仁状结构，大小在主核的1/3以下，是有丝分裂后期丧失着丝粒的落后的染色体片段形成。20世纪70年代初，Matter和Schmid等首先用动物骨髓细胞微核率来测定怀疑具有诱变活力的化合物，并称之为微核。 微核试验与染色体畸变实验有良好的相关性，微核与患癌率也有较好的相关性[1]，蚕豆和动物之间对环境致突变物所引起的染色体畸变等定性反应的一致性可达99%以上。蚕豆和动物的肿瘤细胞有许多共同性，而且致癌因素有许多也是相同的[2]。由于蚕豆根尖细胞微核试验具有许多优点[1，3]，而广泛应用于遗传病理学、环境科学、预防医学等学科的研究，这种方法已经规范化[4]。目前，各种化学产品与日俱增，研究和探索与人民生产和生活密切相关的化学药品对人类健康的影响和潜在危害性，已引起国内外的普遍关注[5,6]而洗涤剂的遗传病理效应，目前报道很少，而且结果不一。因此本次应用蚕豆微核技术对洗衣粉的诱变效果进行探究。目前多数学者认为，在镜检细胞微核时，应按下列标准计数微核： 凡主核大小1/3以下，与主核分离的小核； 小核的着色与主核相当或稍浅； 小核形态可为圆形，不规则等。 1 用品和方法 1.1 实验用品 1.1.1 材料：饱满的蚕豆种子 1.1.2 器材：镊子，刀片，显微镜，水浴锅，大托盘，培养皿，载玻片、盖玻片若干，滤纸 1.1.3 试剂：卡诺固定液（无水乙醇：冰醋酸=3:1），1mol/L盐酸，吉姆萨染液，雕牌洗衣粉，奇强洗衣粉，碧浪洗衣粉，立白洗衣粉 1.2 实验方法 1.2.1浸种催芽：选取大小均匀的饱满的蚕豆种子约20粒，直接放入盛有自来水的脸盆中，浸种24h，此间换水2次。种子吸胀后，将蚕豆种于放入脸盆里，用毛巾覆盖并浇上自来水保持湿度，水淹没1/3,催芽48h。大部分初生根长至1-2cm时，根毛发育良好，准备用来进行检测。 1.2.2 制备待测液:我们选取不同牌子的洗衣粉用来检测，取相同的用量，配成溶液。 1.2.3 用待测液处理根尖：选取初生根生长良好、根长一致的种子，每两粒一组，分别放入待测培养液, 浸没根尖，另外再选取两粒放入自来水中，以做对照。 1.2.4 根尖细胞恢复培养：用水浸洗3次，洗净后在置于培养皿用凉开水进行恢复培养24 h。 1.2.5幼根固定:将恢复培养后的种子从根尖顶端切下1cm长的幼根。用卡诺固定液固定24h。 1.2.6取材、制片：制片时，用蒸馏水浸洗三次，每次5min，吸干，加入1mol/L的盐酸浸没根尖60度酸解大约10min，待幼根软化。吸去盐酸，用蒸馏水浸洗三次，每次1-2min，最后浸入水中；取根置于载玻片上，截下1-2mm长的根尖，滴一滴吉姆萨染液，染色10min，压片观察。 2 结果统计 从每一种培养液中取两个根尖，每个根尖观察1000个细胞，统计微核千分率，以此来表示细胞微核率。 表1 自来水以及不同种类洗衣粉溶液处理对蚕豆根尖细胞微核率的影响 组别 不同种类 根尖数 1000个细胞中微核数 微核率 洗衣粉 （根尖） ‰ 对照组 自来水 2 4 3 3.5 1 立白 2 16 20 9 2 雕牌 2 15 19 8.5 3 奇强 2 17 25 10.5 4 碧浪 2 38 46 21 3 讨论 由上述结果可以看出，和对照组相比每一种洗衣粉都使蚕豆根尖细胞产生了较多的微