角膜缘干细胞的临床和基础与研究.pdf

华 华 中中 科科 技技 大大 学学 博博 士士 学学 位位 论论 文文 华华 中中 科科 技技 大大 学学 博博 士士 学学 位位 论论 文文 中文摘要中文摘要 中文摘要中文摘要 第一部分第一部分 应用活体共聚焦显微镜进行角膜缘干细胞 应用活体共聚焦显微镜进行角膜缘干细胞 第一部分第一部分 应用活体共聚焦显微镜进行角膜缘干细胞应用活体共聚焦显微镜进行角膜缘干细胞 缺失的临床分级研究缺失的临床分级研究 缺失的临床分级研究缺失的临床分级研究 【目的目的】观察角膜缘干细胞缺失中央角膜上皮和角膜缘上皮在活体共聚焦显微镜 目的目的 下的改变，从细胞水平建立一套角膜缘干细胞缺失的临床分级系统。 【方法方法】根据裂隙灯显微镜下荧光素染色的不同阳性表现，将临床诊断为角膜缘 方法方法 干细胞缺失的18例24眼初步分成4个临床阶段组，各组均利用海德堡视网膜断层扫描 仪3代Rostock角膜模块 （HRT3 RCM ）进行活体眼表组织成像。图像信息集中阅读分 析。 【结果结果】5 个形态学指标被发现有助于分析中央角膜区和角膜缘区的上皮层改 结果结果 变：角膜上皮细胞层数的改变；角膜上皮细胞大小和活动性改变；外侵细胞：如炎症 细胞、树突状细胞；角膜上皮层内和基底膜下神经丛的改变；角膜上皮层内血管的出 现。每个临床阶段组都有其对应的共聚焦显微镜下细胞水平的改变，且组与组之间中 央角膜区和角膜缘区的上皮层有明显的形态学和结构学差异。角膜缘干细胞缺失临床 分级系统首次从活体眼表单个细胞水平创立。 【结论结论】角膜缘干细胞缺失中央角膜上皮和角膜缘上皮在细胞水平的形态学和结 结论结论 构学差异与其临床体征有较高一致性，活体共聚焦显微镜可作为诊断极早期角膜缘干 细胞缺失和辅助其分级的有用工具。 【关键词关键词】角膜缘干细胞缺失，活体共聚焦显微镜，HRT3 RCM ，临床分级系统 关键词关键词 3 华 华 中中 科科 技技 大大 学学 博博 士士 学学 位位 论论 文文 华华 中中 科科 技技 大大 学学 博博 士士 学学 位位 论论 文文 第二部分第二部分 人胚胎干细胞标记物在角膜缘 人胚胎干细胞标记物在角膜缘上皮上皮和和 第二部分第二部分 人胚胎干细胞标记物在角膜缘人胚胎干细胞标记物在角膜缘上皮上皮和和 角膜角膜上皮上皮的表达研究的表达研究 角膜角膜上皮上皮的表达研究的表达研究 【目的目的】研究5 个典型人胚胎干细胞标记物碱性磷酸酶 （ALP ）、Nanog 、Oct-4、 目的目的 阶段特异性胚胎抗原 （SSEA）-1 和 SSEA-4 在角膜缘上皮和角膜上皮的表达。 【方法方法】可移植级别人角巩膜组织进行冷冻切片，免疫组织化学方法从蛋白水平 方法方法 检测ALP 、Nanog 、Oct-4、SSEA-1和SSEA-4在角膜缘上皮和角膜上皮的表达，RT-PCR 法从mRNA水平进一步确认SSEA-4、Nanog和Oct-4在角膜和角膜缘的表达。 【结果结果】免疫组织化学法研究显示SSEA-4广泛表达于角膜缘上皮和角膜上皮的 结果结果 各层，ALP散在表达于少量角膜缘前基质层细胞中。SSEA-4的表达经RT-PCR得到确 认。免疫组织化学法和RT-PCR均显示SSEA-1和Oct-4不表达与角膜缘上皮和角膜上 皮。RT-PCR在mRNA水平检测到