peo-b-pvp用于毛细管电泳分离蛋白质的研究.pdf

摘要 捅要 毛细管电泳(CE)作为一种强有力的分析技术，在生物工程、医学药物和食 品检测等生命科学和化学所涉及的领域都显示了极其重要的应用前景，由于CE 的理论分离柱效与样品组分扩散系数成反比，使其在生物大分子(如蛋白质和核 酸)的分离方面应用比较广泛。但由于毛细管内表面的硅羟基电离(pH3)形成 带负电的吸附点，使管壁对生物大分子尤其是碱性蛋白质产生强烈的吸附，导致 峰拖尾、峰形展宽、分离效率与迁移时间的重复性下降，甚至形成不可逆吸附使 分离无法进行。 目前，人们通常采用极端pH、添加剂、外加径向电场和聚合物涂层等几种 方法来抑制蛋白质在管壁的吸附。极端pH和添加剂的方法会降低分离选择性甚 至引起蛋白质变性；外加径向电场又需要特殊的仪器装置：聚合物涂层方法稳定、 高效，是解决此问题的有效途径之一。毛细管涂层的形成大致可分为三类：动态 涂覆，化学键合和物理吸附。其中，动态涂覆方法最简单，但是稳定性差：化学 键合涂层稳定性较好但制作工艺麻烦；物理吸附方法既简便易行又具有较高稳定 性，并且涂层可再生，因而备受亲睐。已用于化学键合方法改性毛细管壁的聚合 基丙烯酰胺(PDMA)等：通过物理吸附方法改性毛细管壁的聚合物包括聚乙烯 醇(PVA)， (Chitosan)，聚乙烯亚胺(PEI)等。 本论文通过原子转移自由基聚合(ATI心)方法合成了两嵌段聚合物聚(乙 二醇．4．乙烯基吡啶)(PEO．6．P4VP)，并将其作为毛细管电泳分离碱性蛋白质的涂 层，取得了较好效果，具体研究内容包括以下几个方面： 一、将聚Ⅳ，Ⅳ-二甲基丙烯酰胺(PDMA)作为物理吸附的涂层，研究了毛 细管预处理过程对电渗流及碱性蛋白质分离的影响，优化了分离条件。 用核磁(NMR)、体积排除色谱(GPC)对其分子量及其分布进行表征，用透射电 子显微镜(TEM)对其在水溶液中的形貌进行了表征。 三、将PE0．6．P4vP嵌段聚合物用于毛细管电泳对蛋白质分离的涂层，研究 了分子量、缓冲溶液pH值、离子强度、聚合物在管壁的形貌对碱性蛋白分离效 率的影响，同时考察了该聚合物对酸性蛋白，酸碱混合蛋白，及生物大分子的分 离效果。 关键词：毛细管电泳蛋白质分离聚乙二醇．6．聚4．乙烯基吡啶毛细管涂层 Abstract ABSTRACT offers time C印illa叫electrophoresis(CE)，whichhi曲e伍ciency，shortanalysis of aIld beenutilizedaSadominant andsman锄ount samplereagentconsumption，haS for theelectrostaticinteraction techniqueproteinanalysis．HoweVer， s印aration be帆een baSic the wall proteins，especiallyproteins，andnegatiVelychaurgedcapillary leadsto the of ontome tailing，bandbroadening，a11dadso叩tionprotein c印i11a巧 peak surface．Inbarefusedsilica interactionsoRenresultinuncontrolled c印i11撕es，this alterationsoftheelectroosmotic now(EOF)a11dirr印roduciblemi伊ationtimes，low maSs