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MALDI -TOF/TOF-MS/MS仪器组成和基本原理 质谱分析原理 2 MALDI-TOF/TOF-MS/MS 2.2 母离子选择原理 2.2 母离子选择原理 2.2 母离子选择原理 2.2 母离子选择原理 2.2 母离子选择原理 2.3 MS/MS图谱 * * 辉骏生物：/ 免费服务热线：400-699-1663 高分辨率和精确度 高灵敏度 fmol级别的鉴定能力 高通量 可同时鉴定并定量数百至数千种蛋白质 优良的配套软件 质谱的特点： 辉骏生物：/ 免费服务热线：400-699-1663 进样系统 离子源 质量分析器 检测器 1.气体扩散 2.直接进样 3.色谱 1.电子轰击 2.化学电离 3.场致电离 4.激光 1.单聚焦 2.双聚焦 3.飞行时间 4.四极杆 辉骏生物：/ 免费服务热线：400-699-1663 1、基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱原理（MALDI-TOF-MS) （Matrix Assisted Laser Desorption Ionization Time of Flight Mass Spectrometry） High vacuum MALDI-TOF-MS仪器结构示意图 辉骏生物：/ 免费服务热线：400-699-1663 1.1进样系统/离子源 基质辅助激光解吸电离(MALDI) 基本原理： 将样品分散在基质分子中并形成共结晶后直接进样, 当用激光(337 nm的氮激光或355 nm的固体激光器)照射晶体时, 基质吸收了激光的大部分能量，使基质分子和样品获得能量投射到气相并得到电离，成为带电荷的离子。因此基质在样品离子形成过程中起到了质子化或去质子化的作用，使样品分子带上正电荷或负电荷，成为带电荷的离子。 离子源特点: 1、使用脉冲式激光； 2、产生单电荷离子和部分双单电荷离子，质谱图中的谱峰与样品各组分的质量数有一一对应关系； 3、离子化效率高，灵敏度高 (fmol～amol) 常用基质： 芥子酸(3,5-二甲氧基-4-羟基肉桂酸)（SA)、龙胆酸(2,5-二羟基苯甲酸)(DHB)、α-氰基-4-羟基肉桂酸(CHCA)、吡啶甲酸(PA)、3-羟基吡啶甲酸(3HPA)。 辉骏生物：/ 免费服务热线：400-699-1663 基本原理： 离子源产生的离子在加速电场获得动能，当进入高真空无电场飞行管道并在此管道内飞行时；质量较轻的离子飞行速度快，早到达检测器；质量较重的离子飞行速度慢，晚到达检测器。因此依据离子的飞行时间与其质荷比平方根 (m/z) 成正比的关系，通过测定飞行时间，计算出相应离子的原子量或分子量。 飞行时间 (Time Of Flight, TOF)质量分析器 1.2 质量分析器/检测器 辉骏生物：/ 免费服务热线：400-699-1663 Pulsed laser 多肽离子在TOF管里飞行，飞行速度取 决于多肽离子的M/Z的大小 Flight tube 1：基质与多肽样本共同 置于刚靶上。 High vacuum Tim e High voltage 2. 样本被激光电离形成多肽 离子混合物 。 20 - 25 kV 5. 检测到每个离子的M/Z后，同一张图谱上计算机输出每个肽段M/Z，即蛋白质的多肽图谱，通过与理论数据库中的肽图片比对，从而鉴定蛋白。 4. 到达检测器的离子，通过检测器检测出每个肽段离子的M/Z. 1.3 MALDI-TOF-MS质谱的分析步骤 1.4 MALDI-TOF-MS质谱峰图 MS峰图 辉骏生物：/ 免费服务热线：400-699-1663 Ion Source #2 Ion Source #1 Precursor Ion Selector (TIS) Collision Cell Mass Analyzer #2 Detector Mass Analyzer #1 Generates and Accelerates Ions TOF 1 Separates Ions Induces CID Fragmentation of Precursor Re-Accelerates Fragments TOF 2 with Mirror Separates Fragments Selects Ions MS/MS分析原理： 在MALDI-TOF-MS的基础上，时