秋水仙碱的提取纯化.docVIP

前言：生物碱一般是指来源于植物界的一类含氮有机化合物，广泛存在于自然界，大多具有较复杂的氮杂环结构，并具有生理活性和碱性，是许多药用植物的有效成分，目前用于临床的生物碱药品已达80种之多，相当多的生物碱具有抗肿瘤、低毒性和低成本的特性。 生物碱在植物界分布较广，但主要分布在高等植物中，尤其是双子叶植物中的毛莨科、防己科、罂粟科、茄科、夹竹桃科、芸香科、豆科等100多科的植物中。单子叶植物中分布较少，裸子植物中更少，低等植物中的蕨类及菌类只有极个别的植物中存在生物碱。 生物碱大多为结晶型固体，只有少数是非结晶型的粉末，一般是无色或白色的化合物，只有少数有色，多具苦味，一般无挥发性，少数有挥发性。 秋水仙碱的提取及分离 1.秋水仙简介及民间药用情况 秋水仙是根药用花卉，有单瓣和重瓣不同品种。原产于欧洲中部和南部及非洲北部，它的球茎是一个古老的草药，称为“秋水仙”，传统上用于治疗痛风，植株高10厘米左右，8～10月开花。花蕾呈纺缍形，开放时似漏斗，与春天开放的番红花（属鸢尾科）相似， 白、粉、淡紫色花朵成丛配植，鲜嫩娇丽，疏密自然，优雅别致。秋水仙喜冷凉阴湿气侯，耐寒。忌粘质土壤，宜排水好、肥沃的沙壤土。球茎夏季有休眠习性。我国自七十年代起从国外引进种子和球茎，分别在北京、庐山、昆明等地试种，已取得可喜成果。由于进口的种球价格昂贵，为加速种球的繁殖，现多采用生物工程栽培技术，通过增殖小鳞茎的数量，扩大种植面积，以适应观赏及药用需要。 我国民间常用秋水仙的花及球茎治疗坐骨神经痛和关节炎等。 2.秋水仙碱 秋水仙碱（colchicine）属于有机胺类生物碱，为淡黄色针状结晶或结晶粉末，口服6毫克秋水仙碱即可致人死亡。但是同时它是很有效的抗肿瘤药物，起作用机制是直接作用于细胞分裂，使纺锤结构无法形成，抑制有丝分裂，使其停止于中期，结果使细胞发育不正常和畸形，最后导致细胞死亡，分裂旺盛的细胞最先受到影响，高浓度时可完全使细胞停止于分裂中期。目前，秋水仙碱在临床上主要用于乳腺癌、肺癌、胃癌、皮肤癌及慢性粒细胞白血病和或起劲病的治疗，此外还可用于缓解痛风的急性发作。秋水仙碱的毒副作用较大，急性中毒后常见症状为剧烈腹痛、腹泻、恶心、呕吐，严重者可致呼吸中枢麻痹而死亡。慢性毒性反应主要表现为对骨髓造血的直接抑制作用，易引起粒细胞缺乏、再生障碍性贫血等。秋水仙碱在人体内由于水解作用代谢很快，排泄也很快，因此只要急救措施得当，急性中毒症状可迅速缓解。 3.秋水仙碱的提取及纯化过程 在秋水仙花及球茎内含有多种毒性极强的生物碱，主要有石蒜碱、雪花莲胺碱及秋水仙碱（又称秋水仙素）等，这些生物碱中含量最高的是秋水仙碱，在球茎中的含量0.3% ~0.5%，秋水仙种子也含多量秋水仙碱，也是提取秋水仙碱的重要原料。另外在我国用山慈菇提取的秋水仙碱注射称“争光81号”用于治疗乳腺癌，取得较好疗效。 故常采用山慈菇或秋水仙进行提取，本次用秋水仙进行提取，流程如下： 具体提取过程（每一步的作用、显色追踪）： 注：秋水仙碱遇浓硝酸显蓝色，以此进行显色追踪，追踪过程中，蓝色是逐步加深的 提取：加60㎏秋水仙粗粉粉末于投料缸中，加80%~90%乙醇180L，加热回流4h,抽滤，再加乙醇回流提取，抽滤，共三次，将三次所得滤液合并。加热回流目的是增大极性大的物质的溶解度，提取出溶于乙醇的有机物； 追踪： 分别取少量滤液和滤渣，向其中滴加等量浓硝酸，滤液显蓝色，即呈阳性，则保留，滤液滤渣无色，阴性，弃除； 分离：将所得总滤液进行减压浓缩，将（上清液）乙醇和与含总生物碱的胶质水溶液进行分离，并回收乙醇 追踪：分别取少量胶质水溶液和上清液，向其中滴加等量浓硝酸，胶质水溶液显蓝色，则保留，上清液不显色证明是乙醇，则回收； 除杂质：向含总生物碱的水溶液加入3~5倍量的水，搅匀后放置，等胶质沉淀后用布袋过滤，胶质用水洗涤三次，洗液与滤液合并，去除不溶物。 追踪： 分别取少量水溶液和不溶物，向其中滴加等量浓硝酸，水溶液显蓝色，保留，不溶物不显色，弃除； 萃取：滤液用10%硫酸调至pH 2,加氯仿振摇萃取至氯仿萃取液无色为止，氯仿液用5%氢氧化钠溶液约300ml洗涤一次，分取氯仿层，同时分离氯仿不溶物，即除去酸水可溶性生物碱。 追踪：分别取少量氯仿层溶液和另一种溶液，向其中滴加等量浓硝酸，氯仿层显蓝色（而且较上三次颜色深，说明秋水仙碱已经初步得到分离），则保留，另一种溶液不显色，弃除； 脱水：向萃取所得的氯仿溶液中加入无水硫酸钠，过滤，得较纯的氯仿溶液 追踪：分别取少量滤液和滤渣，向其中滴加等量浓硝酸，滤液显蓝色，保留，滤渣不显色，弃除； 进一步萃取：蒸馏氯仿至近干，得胶状物，并回收氯仿 追踪：分别取少量胶状物氯仿层和另一种溶液，向其中滴加等量浓硝酸，胶状物氯仿层显蓝色，保留，另一种溶液不