ELISA测定中TMB显色体系的优化及其稳定性研究.pdfVIP

生物技术通报 ·研究报告 · B IO TECHN OLO G Y　BULL E T IN 20 10 年第 2 期 EL ISA 测定中 TM B显色体系的优化及其稳定性研究 李红梅 　陈佳 　徐斐 　曹慧 　M aria Eugen ia (上海理工大学医疗器械与食品学院 ,上海 200093) 　　摘 　要 : 　通过对间接酶联免疫测定中显色体系的各影响因素的研究 ,确定了酶联免疫测定的最优显色体系为二甲基亚 ( ) ( ) 砜 DM SO 配制四甲基联苯胺 TMB 浓度为 0. 3 m g/mL 的溶液为 A 液 , pH5. 5, 0. 2 mo l/L 磷酸氢二钠与 0. 1 mol/L 柠檬酸缓 冲液配制过氧化脲素浓度为 0. 74 m g/mL 的溶液为 B 液 ,两者按一定比例混合后使用 。试验结果表明 ,此显色体系在 25 - 40 ℃内进行都可得到较为准确的结果 ,且 A、B 液混合后在室温下放置 4 h仍可使用 。A 液及 B 液分别在 4 ℃放置 60 d后混合 使用仍不影响测定结果 。 关键词 : 　酶联免疫测定 　显色 　辣根过氧化物酶 　TMB O ptim iza tion of TM B Substra te Chrom ogen ic Sy stem in EL ISA and the Study of Its Stab ility in Storage L i Hongm ei　Chen J ia　Xu Fei　Cao Hu i　M aria Eugen ia (S chool of M ed ica l Instrum en t and F ood E ng ineering, Un iversity of S hangha i f or S cience and Technology, S hang ha i 200093) 　　Ab s tra c t: 　By the study of the factorswh ich influence the chromogen ic reaction in indirect EL ISA , the op tim al chromogen ic system was ob tained. Solution A was p rep ared by TMB disso lved in DM SO w ith the concentration of 0. 3 m g/mL , solution B wa s p rep ared by hydrogen p eroxide urea disso lved in pH5. 5, 0. 2 mol/L N a HPO - 0. 1 mol/L citric acid buffer w ith the concen tration of 0. 74 m g/ 2 4 mL , and the sub strate chromogen ic system wa s p rep ared by m ixing A and B in certain ratio. The exp erim en t resu lts showed that th is sub strate chromogen ic system cou ld indicate the re su lt accurately, and A , B m ixtu re wa s still effective after 4 hours storage at room temp era ture. The m ixtu re of solution A and B still cou ld be ab le to u se in EL ISA