Vill转基因小鼠的制备.pdfVIP

第31卷第2期 实验动物科学 V01．31NO．2 2014年4月 LABORATORYANIMALSCIENCE 2014 April 铲痧彩坳驴匈 §研究报告§ 易驴q鲈、西L《弘凼 Vill转基因小鼠的制备水 殷黎静1’2 杨伟伟1 殷筱舒3 顾小丽1 张艳丽1 李高天1 郑经纬1 吴宝金1 (1．杭州师范大学实验动物科学实验室，杭州310036)(2．江苏大学实验动物中心，镇江212013) (3．山东省青岛第十七中学，青岛266031) 605 摘要：目的通过制备Viii转基因小鼠研究该基因的功能。方法与结果首先由RT—PCR方法获得全长约2bp Vill基因的显微注射DNA构件；显微注射390枚受精卵后，在出生存活的77只仔鼠中获得转基因阳性G。代小鼠19 只，其中16只能够稳定遗传并建系，转基因阳性小鼠外观未有明显改变。结论Viii转基因小鼠为该基因的功能 研究准备了实验材料。 关键词：Vill基因；pEF6／V5His．Viii；显微注射；转基因小鼠 中图分类号：Q95—33文献标识码：A 文章编号：1006—6179(2014)02—0007-06 VILL全称为VILLIN-like，绒毛蛋白样蛋白，是 VILLIN蛋白超家族的成员之一。VILLIN是一种多1材料和方法 能的肌动蛋白调节蛋白，能够依赖Ca2+成核、结合、 帽化、切割上皮细胞中的肌动蛋白。在磷酸化后，通 1．1 材料 1．1．1 过与PIP2、PLC．11、Jak3相互作用来影响细胞形态实验动物、载体和细胞：清洁级C，，BL／6J 和迁移等，在肿瘤癌症和抗细胞凋亡的方面有着重 (B。)小鼠来自杭州师范大学实验动物中心，实验动 要的作用¨1。VILL与VILLIN具有极为相似蛋白结 构，同样具有6个重复的gelsolin—like结构域和一个 宝生物工程(大连)有限公司；DH5cx大肠杆菌购于 headpiece(HP)结构旧1，这预示两者具有相似的功 能，但有关VILL的报道极少，可用于VILL功能研 究的动物模型如基因敲除、转基因动物尚未有报道。 LacZ和L929细胞分别由中科院神经科学研究所孙 2009年吴宝金等¨o通过ENU化学诱变获得一种呈强博士和杭州师范大学刘小玲老师馈赠。 隐性遗传的稀毛小鼠snthr““。，其发生突变的原因 PCR 涉及到9号染色体上Vill基因及Plcdl基因的缺失，Fidelity High Enzyme StrandeDNA 为验证(或排除)Vill基因与稀毛表型的关系，需要 SynthesisKit，Bspl 培育高表达VILL蛋白的Vill转基因小鼠来拯救 DMEM snthr。“。小鼠“被毛稀疏”的表型。本实验通过显DMEM高糖培养液(1×)(GIBCO12800干 微注射方法建立ViU转基因小鼠，为Vill基因的功粉分装)，2．5％胰酶溶液(1×)，青霉素链霉素溶液 能研究提供了材料。 司。无支原体胎牛血清，购