HIV-1型病毒蛋白R基因表达载体的构建及其在前列腺癌细胞系PC-3中的表达.pdfVIP

第20卷第4期 江苏大学学报(医学版) V01．20No．4 of 2010 2010年7月 Journal Edition) July JiangsuUniversity(Medicine HIV一1型病毒蛋白尺基因表达载体的构建及其在 前列腺癌细胞系PC一3中的表达 樊卫飞1，王子盾2，王 平2，刘 平1，卢 春2 (南京医科大学1．第一附属医院肿瘤科；2．微生物学与免疫学系，江苏南京210029) [摘要]目的：利用AdEasy腺病毒载体系统构建含HIV-1病毒蛋白尺(viralproteinR，Vpr)基因的重组腺病毒，使 I酶切后回收大片段， 将其与腺病毒骨架质粒pAdEasy共同转化到BJ5183大肠埃希菌。挑选同源重组质粒，经Pac 上清，使之感染AD293细胞得到第二代病毒，如此反复感染AD293细胞3—4轮，使病毒大量扩增。梯度稀释法测定 RT．PCR和蛋白质印迹技术分别从mRNA和蛋白水平检测目的基因的转录与表达情况。结果：经限制性内切酶检 efu／ml。以MOI为5 测、GFP表达和病毒上清液PCR证实成功构建了携带场r基因的蓖组腺病毒，滴度为3．0×t08 的蕈组腺病毒感染24h后，80％以上的靶细胞能够表达GFP，RT—PCR和蛋白质印迹能够同时检测到目的基因场r的 转录与表达。结论：成功构建含Vpr基因重组腺病毒，并且病毒能够有效感染PC一3细胞，使得目的基因在其中获得 大量表达，为进一步研究Vpr蛋白对PC-3肿瘤细胞的影响及其可能涉及的信号通路奠定了基础。 [关键词]重组腺病毒；HIV·l型病毒蛋白R；PC-3细胞 [中图分类号】 R730．5 [文献标志码]A[文章编号】 1671—7783【2010)04—0286—06 Constructionoftherecombinantadenovirusvector expression carrying HIV-1viral R andits inPC-3cellline proteingene expression FAN Chun2 Zi—dun2，WANG Pi几91，LU Wei-feil，WANG Pi昭2，LIU of FirstAffiliated of and Medical (1．DepartmentOneology，the Hospital；2．DepartmentMicrobiologyImmunology，N蚰jingUniversity，Nanjing Jiangsu210029，China) constructtherecombinantadenovirus HIV—lviral Objective：To [Abstract] containing proteinR(场r) the of inPC-3 from cells．Meth