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蛋白样品制备中各类杂质和杂蛋白的去除 蛋白样品制备中，在细胞破碎之后，既可以利用特定蛋白质的特性来分离某一类蛋白质，比 如亲和纯化，比如前面介绍的磷酸化蛋白富集，或者膜蛋白富集；另外一个考虑方向是去除 杂质去掉样品中某些非目标高丰度蛋白或者杂质的干扰，同样可以达到简化样本的目的。 当然要小心 “倒洗脚水的时候别把婴儿也倒掉了”，一定要选择可靠的产品。 比如，潜在疾病标志物的最好样本来源就是血清或其他体液，此类样本可以提供人蛋白质组 中绝大部分组份。然而用蛋白质组分析方法鉴定疾病标志物最大的挑战来自于血清中大量的 高丰度蛋白对检测的干扰，血清中有大约55%的蛋白为白蛋白，而IgG 大约占血清中蛋白总 量的10-25%，这些高丰度蛋白的存在会增加低丰度蛋白检测的难度，去除占血清总蛋白近 75%的白蛋白和IgG 将有助于更好地鉴定其他的蛋白。G-Biosciences 的AlbuminOUT™白蛋白 去除试剂盒堪称白蛋白去除神器。血浆和脑脊髓液等样本中，包含大量的白蛋白，从而封闭 掉在二维凝胶电泳中发现和鉴定其他低丰度蛋白的可能。AlbuminOUT™白蛋白去除试剂盒被 设计用来在这种样本中大量去除白蛋白。 这种白蛋白去除方法是基于白蛋白和Cibachron 蓝色染料的结合。AlbuminOUT™被优化从样 本中去除人的白蛋白。AlbuminOUT™使用快速离心柱方法，每个柱子含有0.2ml 的染料结合 树脂，从而可以结合大于2mg 的人白蛋白。AlbuminOUT™可以从5-50 微升人血浆中去除大于 98%的白蛋白。 离心柱形式可以在10 分钟内去除白蛋白。高结合力的蓝色染料结合树脂可以从人，猪，羊， 狗，兔，大鼠和牛样本中达到瞬间的结合和去除白蛋白。AlbuminOUT™或许也可以从其他物 种中去除白蛋白。适用于处理25 或50 个样本。 Figure 1: 2D analysis of whole human serum before (left) and after ™ (right) treatment with AlbminOUT . 产品特点：  从样本中不到10 分钟的时间内去除白蛋白  基于白蛋白和Cibachron 蓝色染料的结合  每个柱子的结合力大于2mg 的人白蛋白  从5-50 微升人血浆中去除大于98% 的白蛋白 去垢剂如SDS、Tween、Tritonde 等是蛋白样品处理过程中常用的组分。去污剂在蛋白提取 和样本制备过程中是很重要的物质，特别是研究疏水蛋白时。蛋白样本中高浓度去污剂的存 在能够影响ELISA,IEF 和蛋白的蛋白酶消化，以及用质谱进行分析时抑制肽的离子化。 所谓请神容易送神难。要除掉这些去垢剂？G-Biosciences 推出的DetergentOUT™ GB-S10 去污剂去除柱子和树脂专门设计用来除于蛋白或其他生物样本中所含有的去污剂，树脂能够 从蛋白水溶液和肽样本中去除自由的，未结合的阴离子的，非离子或两性离子的去污剂(e.g. SDS, Triton® X-100 或CHAPS)，同时对于下游进行的质谱或其他技术的分析应用带来最小 的样本丢失。 DetergentOUT™ GB-S10 柱子在第三方的研究使用中表明完全兼容DI-QTOF 和 LC-MS/MS （请 见参考文献）。DetergentOUT™ GB-S10 柱子的使用显著增加到了检测到的肽光谱的数量。除 此之外，DetergentOUT™ GB-S10 柱子对于去污剂有高度的结合容量，比如每毫升固定的树 脂可以结合6mg SDS 和14mg Triton® X-100。 ™ Table 1: A comparison of the detergent removal rates and percentage protein recovery with DetergentOUT GBS10. Tag 蛋白的纯化 带有融合标签的表达产物融合蛋白的纯化通常也是紧接细胞破碎工作进行的。设计融合 标签的主要目的之一就是为了方便后继的亲和纯化。目前最为流行的融合标签自然是 His-Tag，和GST，来自G-Biosciences 等公司都有质量非常稳定可靠的产品，种类还特别 丰富，分别对应不同的上样量和工作压力和流速的需要。笔者在这里介绍一下江湖中盛传的 Tag 蛋白纯化的 “刀剑笑”，目的就是为在产品选择上帮你省点事