人乳腺癌多西紫杉醇耐药细胞株的建立及特性.pdf

第３３卷第２１期 第　三　军　医　大　学　学　报 Ｖｏｌ．３３，Ｎｏ．２１ ２０１１年１１月１５日　　　　　　　　　　 Ｊ　Ｔｈｉｒｄ　Ｍｉｌ　Ｍｅｄ　Ｕｎｉｖ 　　　　　　　　　　 Ｎｏｖ．１５　２０１１ ２２９７ 文章编号：１０００５４０４（２０１１）２１２２９７０３ 短篇论著 人乳腺癌多西紫杉醇耐药细胞株的建立及特性 １ ２ ２ ３ １ ３ １ 李文静 ，张　磊 ，赖娅娜 ，唐金海 ，钟山亮 ，恽　文 ，赵建华 　　（２１０００９南京，南京医科大学附属江苏省肿瘤医院： １ ２ ３ 临床检验中心 ，科研科第三实验室 ，普外科 ） 　　［摘要］　目的　建立人乳腺癌多西紫杉醇（Ｄｏｃｅｔａｘｅｌ，Ｄｏｃ）耐药细胞模型ＭＣＦ７／Ｄｏｃ，初步探讨其生物学特性。方法 　 采用Ｄｏｃ低浓度逐步加量诱导法建立ＭＣＦ７／Ｄｏｃ耐药株；通过细胞形态学观察、生长曲线和群体倍增时间测定、ＭＴＴ 法药物敏感试验及流式细胞术评价其生物学特性；实时荧光定量 ＰＣＲ和Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ分别检测多药耐药基因ＭＤＲ１ ｍＲＮＡ和蛋白的表达。结果　 经１０个月的诱导成功建立ＭＣＦ７／Ｄｏｃ细胞株，可在１００ｎｇ／ｍｌＤｏｃ培养液中稳定生长，耐 药指数为亲代敏感细胞ＭＣＦ７／Ｓ的３３．３倍，对其他多种化疗药物呈交叉耐药状态。光镜下，药物处理后细胞变圆变小、 核分裂象减少；ＭＣＦ７／Ｄｏｃ倍增时间较ＭＣＦ７／Ｓ延长［（４１．６±１．６）ｈｖｓ（３０．６±１．１）ｈ；Ｐ＜０．０１］。与亲代相比，耐药细 胞处于Ｇ期和Ｇ期的细胞增加、Ｓ期减少；ＭＤＲ１基因表达水平增高９０．７倍，蛋白表达转为阳性，而雌激素受体阳性表达 １ ２ 丢失。结论　 ＭＣＦ７／Ｄｏｃ细胞具有典型的多药耐药性，ＭＤＲ１基因和蛋白过表达是其获得性耐药的主要机制之一。 　　［关键词］　 乳腺癌细胞；多西紫杉醇；多药耐药；Ｐ糖蛋白 　　［中图法分类号］　Ｒ７３３５４；Ｒ７３４．２；Ｒ９６９．３　　 ［文献标志码］　Ａ 　　乳腺癌属全身性疾病，综合治疗非常关键，其中化 １．２　细胞培养 疗是不可替代的重要手段之一。然而多药耐药（ｍｕｌｔｉ 　　ＭＣＦ７／Ｓ细胞培养于含１０％胎牛血清、１００Ｕ／ｍｌ青霉素和 １００ ｇ／ｍｌ链霉素的ＤＭＥＭ高糖培养液，在３７℃、５％ ＣＯ饱和 ｄｒｕｇｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ，ＭＤＲ）常导致治疗失败及后期肿瘤的 μ ２ 复发和转移，严重威胁患者生存。多西紫杉醇（Ｄｏｃ） 湿度条件下培养，经２～３次传代后至指数生长期进行实验。 是在天然抗肿瘤药物紫杉醇的基础上，经结构修饰后 １．３　ＭＣＦ７／Ｄｏｃ的建立 　　测定Ｄｏｃ对ＭＣＦ７／Ｓ的半数致死浓度（ＩＣ ）；以ＩＣ 的１／ 获得的一种新型抗肿瘤药物，溶解性好，药效更优。临 ５０ ５０ 床实践表明，以Ｄｏｃ为主的联合化疗是乳腺癌、尤其是 １０００Ｄｏｃ为起始浓度作用 ＭＣＦ７／Ｓ细胞２４ｈ，生理盐水洗５ ［１］ 遍，撤药常规培养并每天换液去除死细胞，７～１８ｄ后存活细胞 淋巴结阳性患者最有希望的治疗方案 。但耐药问 生长恢复，待进入对数生长期后传代 １次，继续培养至生长良 题也不容忽视，其对转移性乳腺癌的治疗反应率为 ［２］ 好且稳定时进行浓度逐步递增性诱导（梯度为１０ｎｇ／ｍｌ）；如此 ３０％～５０％ 。耐药细胞株是研究肿瘤 ＭＤＲ发生和