乙型脑炎病毒膜蛋白B区多肽抗原的表达纯化及血清学评价.pdf

维普资讯 2007，23 (1) 中 国 人 兽 共 患 病 学 报 ChineseJournalofZoonoses 53 文章编号 ：1002—2694(2007)01—0053—03 乙型脑炎病毒膜蛋 白B区多肽抗原的表达、 纯化及血清学评价* 周 惠琼 ，江立敏 ，郑 夔 ，顾耀 亮。，梁文燕。，柯 昌文 摘 要：目的 在原核表达系统中对乙型脑炎病毒包膜糖蛋 白(E蛋 白)的B区多肽抗原进行高效表达、纯化及血清学评 价。方法 利用PCR技术从乙脑减毒活疫苗中扩增编码B区的DNA片段，酶切消化后连接到表达载体 pET22b上，用此连 接产物转化大肠埃希菌BL21(DE3)并表达B区多肽抗原，表达产物经液相层析纯化；用乙脑病人血清对纯化后的B区多肽 抗原进行评价 。结果 重组质粒 pET22b-JEB经双酶切 ，其插入的外源基 因片段为 372bp，与预期 DNA片段大小一致 。将纯 化前与纯化后的蛋 白作 SDS电泳，均可见一条约 16kD的外源基 因蛋 白带，与计算的相对分子质量相符。经WB和 ELISA血清学评价，表明重组B区多肽抗原具有较高的灵敏性及特异性。结论 成功构建了表达载体pET22trJEB，在原核 系统 中表达 的B区多肽抗原具有 良好 的血清学检测价值。 关键词：乙型脑炎病毒 ；包膜糖蛋 白B区；原核表达系统；蛋 白纯化 中图分类号：R373．3 文献标识码 ：A Prokaryoticexpressionandpurificationofpeptideantigen inB domainoftheenvelopeglycoproteinofJapanese B encephalitisvirusanditsserologicalevaluation ZHOU Hui—qiong，JIANG Li—rain，ZHENGKui，GU Yao-liang，LIAN Wen—yan，KEChang-wen (CenterforDiseasesControlandPreventionofGuangdongProvince，Guangzhou510300，China) ABS11RACr：Thepeptideantigen inB domainoftheenvelopeglucoprotein(E—protein)ofJapaneseB encephalitisvirus (JEB)washighlyexpressedinprokaryoticexpressionsystem，anditwaspurifiedandevaluatedforitsserologicalactivities，in whichtheDNA fragmentcodingtheBdomainofenvelopeglycoproteinwasamplifiedbyPCRfrom theattenuatedJapaneseB encephalitisvaccine，enzymaticallydigestedandsubelonedintovectorpET一22b(+ )．TherecombinantBdomainglycoprotein waspurifiedbyliquidchromatographyanditsserologicalactivitieswereevaluatedwithseraofpatientswithJapaneseBenceph— Miffsinfectiom Itwasfoundthatthesizeoftheinsertde genefragmentoftherecombinantplasmidpET-22b-JEBafterdouble enzmy edigestionwas372bps，thatwasjustthesameasthatofthepredicatedDNA fragmentvalue．Oneexogenousprotein bandof16kDacouldbeobservedinSD PAGE analysisbothbeofreandafterpurification．th